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Pyrosequencing analysis of CpG methylation pattern in the RASSF1A gene.The figure illustrates the variation in methylation level between 5 different CpG sites in 4 individual tumor samples.Each sample was run in duplicate and the concordance between the two samples clearly illustrates the reproducibility of Pyrosequencing technology.


Pyrosequencing技术作为一种新的序列分析技术，能够快速地检测甲基化的频率，对样品中的甲基化位点进行定性及定量检测，为甲基化研究提供了新的途径。Pyrosequencing是一种通过合成方法进行序列分析的方法，它通过核苷酸和模板结合后释放的焦磷酸引发酶级联反应，促使荧光素发光并进行检测。这项技术曾经被用作单核苷酸多态性（SNP）的基因型和单倍型的检测，以及细菌和病毒的鉴定和分型研究。这项技术的一个主要特点是在Pyrogarm软件上显示的峰值高度来自于序列分析的原始数据，通过峰值的高度可以精确的检测混合DNA模板中等位基因的频率。

Pyrosequcing系统可以获得以下结果：

1  那些DNA序列位点发生甲基化？

2  每个位点的甲基化程度是多少？

3  这些位点的甲基化和疾病的相关性？