Western Blot样品制备
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1、组织:
组织的处理方法:组织洗涤后加入3倍体积预冷的PBS(磷酸盐缓冲液),0℃研磨,加入5×STOP buffer,(终止缓冲液),180W,6mins,0℃超声波破碎,5000rpm,5mins 离心,取上清。加入β-ME(9.5ml加入0.5ml),溴酚蓝(9.5ml加入0.5ml)煮沸10min,分装后于-20℃保存,用时取出,直接溶 解上样。
2、细胞:
细胞的处理方法: 离心收集细胞或者直接往细胞培养瓶内加入5×STOP buffer,收集,180W,6mins,0℃超声波破碎,5000rpm,5mins 离心,取上清。加入β-ME(9.5ml加入0.5ml),溴酚蓝(9.5ml加入0.5ml)煮沸10min,分装后于-20℃保存,用时取出,直接溶 解上样。
3、分泌蛋白的提取(特例):
直接收集分泌液,加入β-ME、溴酚蓝制样。
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