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中国医科大学附属第一医院呼吸疾病研究所（110001）

温 华 康 健 郑 锐 侯显明 于润江

    树突状细胞（DC）是免疫系统主要的抗原提呈细胞（APC），其在固有免疫反应和适应性免疫反应中均有重要作用。但就肺腺癌而言，其抗原刺激DC 成熟的最佳方式以及负载肺腺癌抗原后的DC 与自然杀伤细胞（NK）细胞间相互作用的机理尚不完全清楚。用凋亡（1.33μmol/L 顺铂所致）作为肿瘤相关抗原（TAA），刺激人外周血单核细胞来源的DC（mo-DC）。通过比较凋亡的A549 细胞对mo-DC表型、超微结构和白介素（IL）-12 分泌量的影响，来评估其对诱导mo-DC 成熟能力的影响，同时观察凋亡的肺腺癌A549 细胞所诱导成熟的mo-DC（A-DC）对NK 细胞杀伤能力的影响。体外诱导DC，用顺铂所致凋亡的A549 细胞负载于DC；流式细胞术测定DC 表面标志，电镜观察DC 形态和超微结构，ELISA 法测定IL-12 分泌量；流式细胞术和Hoechst 染色判定A549 细胞凋亡；4h- 51Cr 释放法测定A-DC 对CD56＋NK 细胞杀伤K562 细胞能力的影响。结果显示：（1）顺铂浓度为1.33μmol/L 时，A549 细胞凋亡率可达19.7%，细胞大多被阻滞在G1 期。（2）扫描电镜下可见DC 伸展出大量大小不一的胞质突起，其末端圆钝且细胞膜光滑无皱折。成熟的DC（mDC）体积大于不成熟的DC（iDC），但表面突起较iDC 减少。（3）透射电镜下可见DC 的胞体周围有不规则突起和褶皱；胞核染色深，偏向一侧，形状不规则，多为分叶状核内异染色质沿核边高度凝聚；胞质线粒体较为丰富，较多吞饮大泡及小泡。（4）人DC 特异性表面标志CD1a 为68.7%。A-DC 的表面标志 HLA-DR 为39.49%，CD80分别为54.33%。（5）DC 仅能分泌少量IL-12，其细胞上清浓度低于20 pg/ml；A-DC 分泌IL-12 的能力增强，其细胞上清浓度分别为（289.7±45.2）pg/ml。组间有统计学意义（P＜0.01）。（6）DC 和A-DC均能使NK 细胞对K562 细胞的杀伤能力增强，但二者间有统计学意义（P＜0.01）：在DC 作用下，当效靶比（effector：target，E：T）为5、10 和20 时，NK 细胞对K562 细胞的裂解率分别为（3.7±0.96）%、（18.33±2.29）%和（46.8±3.39）%；在A-DC 作用下，E：T 为5、10 和20 时，NK 细胞对K562细胞的杀伤能力进一步增加，其裂解率分别为（13.33±0.76）%、（33.67±1.19）%和（55.87±2.50）%。（7）当A-DC 的上清加入NK 细胞时，NK 细胞对K562 细胞的杀伤能力显著增加，如E：T 为20时，K562 细胞裂解率为（45.73±0.06）%，而未加A-DC 时 K562 细胞裂解率（10.7 ±0.529）%（P＜0.01）。（8）当E：T 为20 时，NK 细胞对K562 细胞的裂解率是（47.1±0.96）%；加入干扰素（interferon，IFN）-γ后，NK 细胞对K562 细胞的裂解率是（46.9±4.85）%，与NK 细胞对照组无显著差异（P＞0.05）；加入IL-12 后，NK 细胞对K562 细胞的裂解率是（61.1±1.57）%，与另外二组差异显著（P＜0.01）。（9）当E：T 为20 时，NK 细胞对K562 细胞的裂解率是（19.2±0.82）%；加入A-DCsup后，NK 细胞对K562 细胞的裂解率是（48.9±3.84）%，与NK 细胞对照组有统计学意义（P＜0.01）。A-DCsup 作用下的NK 细胞对K562 细胞的裂解率，加入IFN-γab 后，是（45.3±1.31）%，与A-DCsup组无显著差异（P＞0.05）；加入IL-12ab 后，是（48.1±0.49）%，与A-DCsup 组无显著差异（P＞0.05）。结果表明：（1）顺铂所致凋亡的A549 细胞能刺激DC 成熟。（2）iDC 通过细胞间接触，增强NK 细胞的细胞毒作用。（3）A-DC 通过细胞间接触和分泌细胞因子的方式，增强NK 细胞的细胞毒作用。（4）A-DC 可通过IL-12 和IFN-γ以外的细胞因子活化NK 细胞的细胞毒作用。