EB的危害和使用
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发布日期: 2006-05-21 19:57 文章来源: 丁香园
关键词: EB 核酸染料 致癌 危害 点击次数:

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EB是诱变剂,有累积效应,不要直接接触,但是要注意通过呼吸摄入,故此环境要通风。

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EB可以被皮肤吸收。做实验的时候一定要带手套。它是DNA突变的诱变剂,可以嵌入DNA,使DNA发生突变,致癌。
但是,只要按照标准的操作使不会有问题的。



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可以用GoldViewTM代替EB

GoldViewTM 核酸染料——使用说明

概 述

GoldViewTM是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,采用琼脂糖电泳检测DNA时,GoldViewTM与核酸结合后能产生很强的荧光信号,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,而单链DNA呈红色荧光。GoldView不仅能染DNA,也可用于染RNA。

通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验,致突变性结果均为阴性;而溴化乙锭(EB)是一种强致癌剂。因此用GoldviewTM代替EB不失为一种明智的选择。

使用方法

1. 将100ml琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8%~2%)在微波炉中融化。
2. 加入5µl GoldView,轻轻摇匀,避免产生气泡。
3. 冷却至不烫手时倒胶,待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。
4. 电泳完毕在紫外灯下观察。若使用数码相机照像记录,则关闭相机的闪光灯,放在自动档即可;若使用凝胶成像系统照相,通过调节光圈、曝光时间,选择合适的滤光片,可得到成像清晰、背景较低的照片。

注意事项

1. 胶厚度不宜超过0.5cm,胶太厚会影响检测的灵敏度。
2. 加入GoldView的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响,但不明显。
3. 通过凝胶电泳回收DNA片段时,建议使用GoldView染色,在自然光下切割DNA条带,避免紫外线与EB对目的DNA产生的损伤,可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。
4. 虽然未发现GoldView有致癌作用,但对皮肤、眼睛会有一定的刺激,操作时应戴上手套。

电泳结果显示GV灵敏度与EB相当

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EB和PI一样,对死细胞的穿透膜的能力比较强,对活细胞穿透膜能力不是很强。不过EB比PI的穿透活细胞膜能力要强。
想想测定凋亡细胞时候用PI就知道了。
活细胞有电位差,这些荧光染料一般过不去。
但是,一定要防护好。
只是不要吓到自己就行。

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关于EB的内容:EB是一种诱导有机体突变的物质和一种潜在的致癌物质。至于其危害性,该书认为其最大的危险是当混合一个5mg/ml的储存液时吸入溴化乙锭粉末,因此,我们尽量要要从供应商那里购买预先混合好的5mg/ml的储存液,在使用的时候将其稀释为最终浓度为1μg/ml的染色液。用稀释溶液(1μg/ml)规范操作凝胶染色的危险很小。如果条件允许,可以选用亚甲基蓝——一种安全的但是灵敏性低的染色剂。

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有种方法大家可以试一试:不在胶中加EB,待电泳跑完后,将胶放入一个固定容器中(有盖最好),在容器中加入TE缓冲液和EB染色,效果是一样的哦!!染色液可多次使用,大家在配胶和加样的时候就不必胆战心惊了,而且电泳槽是干净的。

上海孤儿:

EB,危险品,能诱导癌症。至今仍用于牲畜的锥虫病预防。对小鼠没有显著毒性,对牲畜没有光敏效应。苯酚,危险品,有什么危害大家都知道。低浓度时却可用于治疗哮喘。
冰乙酸,非危险品。低浓度是醋,高浓度可致死。
 (见分子克隆)

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建议实验室在直接往胶里加EB时:
准备两个锥形瓶,
先往第一个瓶里加电泳缓冲液和琼脂糖,微波熔化;
把化好的胶倒进第二个瓶里;
等温度降到刚刚不烫手,往第二个瓶里加入EB;
往载胶板里倒胶。

这样,可以防止EB蒸汽挥发危害呼吸道黏膜。

编辑:xiaodonglv0828





   作者: 丁香园集体创作


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