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一、目的要求：

1．学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。

2．学习并掌握蛙类坐骨神经干标本的制备方法。

3．学习电生理学实验方法。

4．观察蟾蜍坐骨神经干复合动作电位的波形，了解其产生的基本原理。

二、基本原理：

神经干在受到有效刺激后，可以产生动作电位，标志着神经发生兴奋。如果在神经干另一端引导传来的兴奋冲动，可以引导出双相的动作电位，如在两个引导电极之间将神经麻醉或损坏，则引导出的动作电位即为单相向动作电位。

神经细胞的动作位是以“全或无”方式发生的。坐骨神经干是由很多不同类型的神经纤维组成的，所以，神经干的动作电位是复合动作电位。复合动作电位的幅值在一定刺激强度下是随刺激强度的变化而变化的。

三、动物与器材：

蟾蜍、常用手术器械（手术剪、手术镊、金冠剪、眼科剪、毁髓针和玻璃分针）、蛙板、固定针、不锈钢盘、污物缸、粗棉线、任氏液、计算机生理信号处理系统、神经屏蔽盒。

四、方法步骤：

1．蟾蜍的单毁髓与双毁髓

一手握住蛙或蟾蜍（可用纱布包裹蟾蜍躯干部），背部向上。用拇指压住蛙或蟾蜍的背部，食指按压其头部前端，使头端向下低垂；另一手持毁髄针，由两眼之间沿中线向后触划，当触及到两耳中间的凹陷处（此处与两眼的联机成等边三角形）时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置。将毁髄针由凹陷处垂直刺入，即可进入枕骨大孔。然后将针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，以捣毁脑组织。如毁髄针确在颅腔内，实验者可感到针尖触及颅骨。此时的动物为单毁髓动物。再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转冋后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，而后瘫痪如棉，此时的动物为双毁髓动物。如动物仍表现肢肌肉紧张或活动自如，必须重新毁髓。操作过程中应注意使蟾蜍头部向外侧（不要挤压耳后腺），防止耳后腺分泌物射入实验者眼内（如被射入，则需立即手生理盐水冲洗眼睛）。

2．坐骨神经干标本制备：

（1）剥制后肢标本

（2）分离两后肢

（3）分离坐骨神经

3．测定：阈刺激、最大刺激，打印不同刺激引起的动作电位重叠显示波形。

4．测定：双相动作电位的潜伏期、时程、电位值1、电位值2，打印结果与数据。

注意：先通过调节补偿，使基线位于0水平。

选做：单相动作电位测定（测定内容同上）。

参数：触发采样，单通道输入，刺激A输出，选单刺激A。其它参数自己调节。

记录动作电位常用刺激波宽0.1ms；常用滤波200-1000Hz；常用时间常数0.01；常用采样时间20us；常用采样点数500-1000。

五、实验结果：

1．刺激强度——动作电位幅度。

2．动作电位测定分析。

六、讨论：

1．对实验结果的分析。

2．实验中的注意事项和关键步骤。