测序后序列不正确
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反应成分问题:
可能的原因 | 解决办法 |
聚合酶的保真性不够 | 选择高保真性的聚合酶,如Pfu |
四种dNTP的浓度不相等 | 使四种dNTP浓度相等 |
模板DNA降解 | 使用新鲜的模板 当分析或从凝胶中切割回收PCR产物时,限制紫外线照射时间 |
Mg离子过量 | 使用能产生足够的产物量所需的最低Mg浓度 |
反应条件问题:
可能的原因 | 解决办法 |
反应条件不好 | 减少循环数 降低延伸时间 减少Mg离子浓度 |
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