dxy

    网友[小青蛙]:
    我做了一个新药，主药的含量大约为93%，我把有关物质订为8%，我现在没有对照品，我用的是自身对照法。因此有2个问题：1、我是否配制自身对照必须用8mL 稀释到100ML；如果用1ML来做，再乘以8是否合理？2、有关物质订为8％是否合理？

    网友[HPLC专家]回答：
    第一个问题，自身对照法是不太合适的，但你现在没有对照品，只能用归一化。这是没有好办法的办法。用归一化法，则似乎与你上述配的浓度方式无关。第二个问题，一个新药，主药的含量大约为93%，把有关物质订为8%，这要看此药是否为生化药或半合成药或国外标准就是如此，并有充分理由，如能完全说明8%的有关物质的结构和毒性等。

    网友[astra]：
    1、进样环与进样量的关系。 我的进样环是20微升，那么我进2微升或者5微升的样品可以么？
    2、在洗脱系统中加入缓冲盐，它的作用是什么呢，对柱子有损伤么？怎样去选择用那种缓冲盐呢？
    3、看柱效的高低好象决定于理论塔板数，那如何确定所使用柱的理论塔板数呢？
 
   网友[HPLC专家]回答：
    1、除非你用内标法，否则用六通阀进样，进样环是20微升，那么进2微升或者5微升的样品，RSD将加大。进样量最好为进样环体积的3-5倍。它还有一个前提：进样针内已无浓度差。现在有一种流行的说法，由于如今的HPLC全部采用“六通阀＋进样环”方式进样，所以进样的精度早已不是问题，原先提倡的内标法不再需要。不知大家在实际操作中，真实的RSD如何，能达到1％以内的有多少？超过2％的有多少？希望大家能发表高见。

    2、在洗脱系统中加入缓冲盐，它的作用是改善峰形，改变选择性，改变保留时间，但缓冲盐对仪器和柱子有一定损伤，需要保养，如及时用10-30％左右的甲醇15ml冲洗10min，去盐。关于怎样选用那种缓冲盐问题，不好笼统而论？要考虑缓冲盐的溶解度，紫外截止波长。如果是LC-MS，还要考虑挥发性等等。

    3、理论塔板数，n=5.54*[tr/w0.5]*[tr/w0.5]，但现在的仪器，积分仪或工作站均能自动给出，不需要人手动计算了。


    网友[丁香园园丁]：
    用HPLC测定合成样品中醋酸的含量，样品为蛋白的醋酸盐，量少，不能用常规法测定，请问如何处理？

    网友[HPLC专家]回答：
    你可采用如下条件测试：

    Adsorbent:  NUCLEODUR C18 Pyramid, 5 um
    Column:  125 x 4 mm  
    Eluent:  0.2% H3PO4
    Flow rate:  1 ml/min  
    Temp:  Ameb
    Detection:  202 nm
    Inj. Vol.:  2 ul
    retention time: Formic acid,3min, Acetic acid, 5min

    网友[lzq]：
    能否给推荐关于讨论ELSD标准曲线方面的文章或书籍？我也查了些资料，但好象大家对做ELSD标准曲线时的峰面积和浓度的关系还没有个共识。如果您刚好不忙，能否谈下您对做ELSD标准曲线的体会？

    网友[HPLC专家]回答：
    ELSD作为通用检测器，非常适合无紫外吸收的物质的检测。但由于灵敏度有限，又是新技术，国内外的对ELSD的研究与应用都有限，所以对做ELSD标准曲线时的峰面积和浓度的关系还没有待深入研究。对许多背景的干扰等问题，可能也与紫外检测不同。你正好也可对此多加分析，相信会有好文章出于你手。也希望你能把实验结果告诉我。

    国外对ELSD的应用研究可能不如国内，因为中药成分多而复杂的原因。国外的文献不多，举例有：

    1、Felton,-M-J. Are ELSDs coming out of the shadows?Anal-Chem. 2002 Dec 1; 74(23): 631A-634A

    2、Fang,-L; Pan,-J; Yan,-B.High-throughput determination of identity, purity, and quantity of combinatorial library members using LC/MS/UV/ELSD.  ChemRx Advanced Technologies, South San Francisco, California 94080, USA.Biotechnol-Bioeng. 2000-2001; 71(2): 162-71

    3、 Kimura,-K; Kagami,-S; Ikeda,-Y; Takahashi,-H; Yoshihama,-M; Kusakabe,-H; Osada,-H; Isono,-K. .New types of liposidomycins that inhibit bacterial peptidoglycan synthesis and are produced by Streptomyces. I. Producing organism and medium components.J-Antibiot-(Tokyo). 1998 Jul; 51(7): 640-6。 

    国内应用研究文章有45篇左右。其中对你的问题有关联，你可对照研究一下。举例有：

    1、王明娟，胡昌勤，金少鸿，氨基糖苷类抗生素在蒸发光散射检测器中响应因子的一致性考察。药学学报，2002，37(3)：204-206。该文用HPLC-ELSD法测定了一组氨基糖苷类抗生素（阿米卡星、西索米星、奈替米星、依替米星和一类新药威替米星）的线性方程。色谱条件：Diamonsil C18柱150mm×4.6mm，5μm；流动相0.2mol/L三氟醋酸-甲醇(94:6)；流速0.6mL/min。检测器条件：漂移管温度110℃，气体流速2.80L/min。 

    2、洪建文，胡昌勤，盛龙生，喹诺酮类抗生素在蒸发光散射检测器中响应因子的一致性考察。药学学报，2003，38(9)：695-697。该文方法：用HPLC-ELSD法测定了几种喹诺酮类抗生素（依诺沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、洛美沙星和加替沙星）的进样量与响应取双对数的线性方程。色谱条件：YMC -Pack ODS-AM柱（150mm×4.6mm ID，5μm）；流动相0.5%三乙胺水溶液（三氟醋酸调至pH2.5）-乙腈（48:12）；流速0.6mL/min。检测器条件:漂移管温度117℃，气体流速3.0L/min。

    3、黄永焯，王宁生，HPLC/ELSD在天然药物分析中的应用。中药新药与临床药理，2001V12N6 444-448。该文是对近十年来高效液相色谱/蒸发光散射检测器（HPLC/ELSD）的联用作一综述。

    由于我对ELSD研究不多，不便在众多行家里手面前直言。只能把国内外现状、文献和方法作一例举。



编辑：7100