条带弥散
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发布日期: 2011-11-29 17:31 文章来源: 杭州朗基
关键词: 丁香园 生物专题 杭州朗基 PCR 条带弥散 点击次数：

反应成分问题：

可能的原因 解决办法 
   污染    使用阴性对照（无模板），如果阴性对照显示条带或弥散，更换所有的试剂
   模板过量    1.通过电泳检查模板的浓度
   2. 减少起始模板，对于低复杂度的模板（例如质粒、lambda、BAC DNA），每50ul反应使用1pg-10ng DNA；对于高复杂度的模板（例如基因组DNA），每50ul反应使用1ng-1ug DNA
   模板降解    1. 通过电泳检查模板完整性
   2. 重新纯化模板
   3. 分离新鲜的模板
   引物浓度过高    降低引物浓度
   Mg离子浓度过高    在1.5-4mM区间按0.2-0.25mM的间隔降低Mg离子浓度
   聚合酶浓度太高    减少酶的量

反应条件问题：

可能的原因 解决办法
   变性温度太低    按1℃的变化量提高变性温度
   变性时间太短或太长    按5秒的变化量调节时间
   延伸时间过长    按15秒的变化量缩短时间
   循环数太多    减少循环数

 


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