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问：在用annexin v/pi双染流式测凋亡，测出来正常对照细胞凋亡率就很高。因为是贴壁细胞要消化，试剂盒还要求4度PBS漂洗两遍，再悬在binding buffer里染色，这样反复吹打，离心对细胞损伤很大。我想知道PBS漂洗的目的是什么，能少漂一次或者不漂洗吗？要减少正常对照凋亡率还有什么需要注意的？

答：

1、PBS漂洗的目的：就是去掉胰酶和细胞碎片，如果你的细胞悬液碎片不多，可以洗一次，另外，吹打细胞时，先在吸管或枪头多吸一些液体，吹时少吹一些，避免产生气泡和气液产生的切力损伤细胞。

2、4度PBS：就是为了避免细胞活化，细胞凋亡的过程也是一种活化，是一种连锁的促进过程。

3、右上象限细胞一般为急性坏死细胞 ，参比正常对照，如果数量相似，不应算在凋亡，晚期凋亡细胞应在以前向角、侧向角为轴的左下象限。急性坏死细胞应在右上象限。通过划分，可以分开的。而死亡细胞着色后，其荧光量没有凋亡细胞高。