DNA甲基化作为重要的表观遗传学标记信息,对于表观调控机制的时空特异性研究具有重大意义,因此也成为表观遗传学的研究热点。
表观遗传学研究已经证实了特定基因区域的DNA甲基化修饰对于染色体构象、基因表达调控机制有着重要影响,而全基因组DNA甲基化研究将是表观基因组学最为关注的内容之一。
Bisulfite处理能够将基因组中未发生甲基化的C碱基转换成U,行PCR扩增后变成T,与原本具有甲基化修饰的C碱基区分开来,再结合高通量测序技术,可绘制单碱基分辨率的全基因组DNA甲基化图谱。
特定物种的高精确度甲基化修饰模式的分析,必将在表观基因组学研究中具有里程碑式的意义,并且为细胞分化、组织发育等基础机制研究,以及动植物育种、人类健康与疾病研究奠定基础。
一、 技术优势:
单碱基精确度:精确分析每一个C碱基的甲基化状态。
里程碑式的研究:特定物种的表观基因组学研究的重要内容,适用于所有具有精确基因组图谱的物种。
二、工作流程:
三、生物信息学分析:
标准信息分析
1. Bisulfite-seq序列与参考序列的比对;
2. 深度和覆盖度分析
2.1 C碱基有效测序深度的累积分布
2.2 不同reads测序深度下的基因组覆盖度
3. 计算C碱基的甲基化水平
4. 全基因组甲基化数据分布趋势分析
4.1 甲基化C碱基中CG, CHG 与CHH的分布比例(H=A、C or T,以下同)
4.2 CG、CHG和CHH中的所有C的甲基化水平
4.3 各条染色体中CG、CHG和CHH中C的甲基化水平(该项分析只针对物种:人)
4.4 统计不同基因区域内CG、CHG和CHH中C的甲基化水平
4.5 不同基因元件区域中CG、CHG和CHH中C的甲基化水平
4.6 CHG,CHH中甲基化C附近的9bp序列的序列特征分析
5. 全基因组DNA 甲基化图谱
5.1 染色体水平的甲基化C碱基的密度分布(该项分析只针对物种:人)
5.2 Scaffold的甲基化C碱基密度分布(该项分析针对物种:非人)
5.3 不同基因组区域的甲基化分布特征
5.4 基因组不同转录元件中的DNA甲基化水平
6. 差异甲基化区域(DMR)分析
信息分析流程如下:
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