IP-one检测实验的一般实验流程
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发布日期: 2011-10-18 16:45 文章来源: Cisbio
关键词: 丁香园 生物专题 htrf IP-one检测 点击次数:

实验原理:

HTRF IP-one系列产品是针对Gq蛋白GPCR的分析平台。该产品通过抑制通路中IP-One的降解,来实现稳定检测Ca流通路的目的,可检测缓慢结合的GPCR。(如图示)

 

实验准备:

1. HTRF IP-one检测试剂盒(以HTRF IP-one Tb试剂盒为例)
      该系列试剂盒含有:
      1) Anti-IP1 cryptate Tb conjugate (lyophilized)
      2) IP1-d2 conjugate(lyophilized)
      3) IP1 calibrator
      4) IP1 control(lyophilized)
      5) IP-1 stimulation buffer
      6) IP-1 Tb conjugate & lysis buffer

      2. 实验所需的细胞
 

一般试验流程(以悬浮细胞为例):

1. 按试剂盒说明,调制部分HTRF试剂
       2. 细胞解冻/准备
      3. 添加细胞、HTRF试剂(IP-1 stimulation buffer)、及化合物(Compound)
       4. 37摄氏度孵化(Incubation),时间以优化实验的结果为准(约半小时至2小时)
       5. 添加HTRF试剂(先加IP-one d2,再加Anti-IP1 cryptate Tb conjugate)
       6. 室温孵化(Incubation)约1小时
      7. 送入读板仪读板(read)
 

 

具体实验背景、实验描述及注意事项, 点此下载 protocol进一步阅读。


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