山东大学齐鲁医院呼吸科（250012） 耿治英 吴大玮 韩 进 冯进波
研究耐碳青霉烯类抗生素的铜绿假单孢菌OprD 的表达水平，探讨济南地区铜绿假单孢菌耐碳青霉烯类抗生素的机制。收集171 株从医院获得性肺炎患者痰液中分离的铜绿假单孢菌，提取其中13株对碳青霉烯类抗生素耐药的菌株RNA，应用荧光实时定量PCR 分析铜绿假单孢菌OprD 的表达水平；采用超声破碎法制备外膜蛋白，超速离心收集外膜蛋白，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离外膜蛋白。
结果表明（1）14 种抗菌药物对耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单孢菌的抑菌环直径：本组从医院获得性肺炎患者痰液中分离的171 株铜绿假单孢菌中，经纸片扩散法敏感试验证实79 株对亚胺培南和美罗培南耐药，耐药率高达46.2%；（2）荧光实时定量RT-PCR 检测铜绿假单孢菌oprD 表达：实验室标准株Ct 值的oprD/rpsL 为1.42。13 株碳青霉烯耐药株Ct 值的oprD/rpsL 为1.17±0.03，与实验室标准株比较差异有统计学意义（t＝3.07，P＜0.01）。2 株碳青霉烯敏感株Ct 值的oprD/rpsL 为1.58±0.31，与实验室标准株比较差异无统计学意义（t＝0.516，P＞0.25）；（3）铜绿假单孢菌外膜蛋白（OMP）图谱：我们观察到铜绿假单孢菌OMP 有7 个主要带，相对迁移率分别是4 1000、3 4000、3 2000、2 9000、25.5000、2 4000、2 2000，与Fernandez-CuencaF 等观察到结果基本一致。在本研究结果中碳青霉烯耐药株在66 与29000 处表达明显下降，考虑该株铜绿假单孢菌耐碳青霉烯类抗生素与2 9000 外膜蛋白表达下降有关。碳青霉烯耐药株66 和67 在2 4000 处过度表达，推测为青霉素结合蛋白。提示济南地区铜绿假单孢菌耐碳青霉烯类抗生素与OprD 的表达水平下降有关。
