解放军总医院呼吸科(100853) 佘丹阳 刘又宁
克隆一株临床分离的多药耐药阴沟肠杆菌的ampC 基因,并研究其编码的AmpCβ-内酰胺酶的特性。聚合酶链反应(PCR)扩增阴沟肠杆菌ECLC074 的ampC 基因,将扩增的目标片段连接入pMD18-T进行双链测序后,进一步克隆入pACYC184 质粒,用获得的pACYC184/ampC 重组质粒转化大肠杆菌MC4100。采用琼脂稀释法测定阴沟肠杆菌ECLC074,大肠杆菌 MC4100 及大肠杆菌 MC4100 重组菌的抗生素敏感性,采用三维试验及等电聚焦电泳研究β-内酰胺酶的特性。结果显示:DNA 测序及限制性酶切分析结果表明,阴沟肠杆菌ECLC074 的ampC 基因已被克隆入pACYC184 质粒,大肠杆菌 MC4100 重组菌和阴沟肠杆菌ECLC074 均产生一种等电点为7.8 的β-内酰胺酶,该酶具有AmpCβ-内酰胺酶的耐药表型特征。结果表明:阴沟肠杆菌的ampC 基因可以被克隆入pACYC184 质粒,并能在大肠杆菌 MC4100 中表达,这为深入研究染色体AmpCβ-内酰胺酶创造了条件。