细胞转染

细胞转染可以：

（1）真核细胞可以掺入外源 DNA 而获得新的遗传标志；

（2）应用于转基因动植物；

（3）应用于生物制药、基因治疗、RNA 干扰。

实验步骤：

一、细胞传代

1.   试验准备：200 ul/1 ml Tip 头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。

2.   弃掉培养皿中的培养基，用 1 ml 的 PBS 溶液洗涤两次。

3.  用 Tip 头加入 1 ml Trypsin 液，消化 1 分钟（37℃，5%CO2）。用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。

4.   加入 1 ml 的含血清培养基终止反应。

5.   用 Tip 头多次吹吸，使细胞完全分散开。

6.  将培养液装入离心管中，1 000 rpm 离心 5 min。

7.   用培养液重悬细胞，细胞计数后选择 0.8X10⁶ 个细胞加入一个 35 mm 培养皿。

8.  将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。

9.  将培养皿转入 CO₂ 培养箱中培养，第二天转染。

二、细胞转染

1.  转染试剂的准备

（1）将 400 ul 去核酸酶水加入管中，震荡 10 秒钟，溶解脂状物。

（2）震荡后将试剂放在 -20 ℃ 保存，使用前还需震荡。

2.   选择合适的混合比例（1:1-1:2/脂质体体积：DNA 质量）来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。

3.  将混合液在室温放置 10-15 分钟。

4.  吸去培养板中的培养基，用 PBS 或者无血清培养基清洗一次。

5.  加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。

6.  到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养 24-48 小时。

三、第二次细胞传代

1.   在转染后 24 小时，观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。

2.   再次进行细胞传代，按照免疫染色合适的密度 0.8X10⁵ 个细胞/35 mm 培养皿将细胞重新粉入培养皿中。

3.   在正常条件下培养 24 小时后按照染色要求条件固定。

4.  转染条件优化可以参考 TransFast 的使用说明书。

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编辑： qimx    来源：丁香园