细胞凋亡检测实验

细胞凋亡检测可以：

（1）用于肿瘤细胞和组织在内的不同种类病理标本研究；

（2）应用于临床诊疗，新药研制、生物制品开发、肿瘤放化疗、以及从促凋亡角度探索肿瘤的基因治疗；

（3）对相关疾病的早期发现、放化疗的疗效评价具有举足轻重的地位。

实验步骤：

一、试剂准备

1.  三尖杉酯碱（HT）：300 μg/ml；

2.  Tris-HCl（pH7.5）：100 mmol/L；

3.  EDTA 缓冲液：5mol/L；

4.   碱性裂解液：0.2mol/L NaOH；

5.  醋酸钠：3mol/L KAc（pH4.8）；

6.  PI 母液：500 μg/ml；

7.  Ho33342 母液：2 mmol/L；

8.  人早幼粒白血病 HL-60 细胞：用含 10% 小牛血清的 RPMI1640 培养基在 37℃，5% CO₂ 条件下培养。

9.  其他：异丙醇、1%SDS、70% 乙醇、溴酚蓝、蔗糖指示剂、TBE 电泳缓冲液、1% 琼脂糖、溴乙锭。

二、三尖杉酯碱诱发 HL-60 细胞凋亡

1.  实验前约 24 小时，接种两瓶 HL-60 细胞，标记 ①、②，每瓶含约 6 ml 培养液，置 37℃，5% CO₂ 培养箱培养。

2.  实验前约 2.5 小时，当细胞密度达到 70%，①号瓶加入三尖杉酯碱 200 μl，使终浓度为 1 μg/ml，②号瓶中加入同等量 PBS（pH7.4）作对照。共同放入培养箱中继续培养 2.5 小时。

3.  Ho33342 和 PI 双重染色鉴别三种细胞

（1）染色：将瓶中的细胞摇匀取 200 μl 于 1.5 ml 的离心管中，加入 Ho33342 母液 2 μl，PI 20 μl，染色 15 分钟。

（2）滴片：取一载玻片用双面胶围成一小室，从离心管中各取以上染色后的细胞悬液 10 μl，加入小室内盖上盖玻片，荧光镜下用紫外激发光，高倍镜下观察，区别三种细胞，并注意三者比例。

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编辑： qimx    来源：丁香园