茵栀黄地塞米松诱导大鼠肝葡萄糖醛酸转移醇活性的研究
【摘要】 目的:研究茵栀黄,地塞米松对SD大鼠肝UDP-葡萄糖醛酸转移醇(UDPGT)活性的影响。方法:建立蓝桅黄、地塞米松诱导的SD大鼠的动物模型.参照Black氏方法驯定大鼠肝UDPGT活挂。出现最大效应的时间分别是:茵栀黄为诱导第3天,地塞米松为诱导第5天并伴有肝蛋白盾舍崴争肝重增扣。结论:茵扼黄、地塞米松均能诗导大鼠肝UDPGT活性,但两者的诱导机理可能不同。
【关健词】 茵栀黄注射液;地塞米松;二磷酸尿葡萄糖醛酸转移醇 体内诱导
1 材料与方法
1.1 动物 雄性SD大鼠96只.鼠龄6~8周.体重160~230g,由广西药物研究所实验动物室提供。
1.2 药物 茵栀黄注射液(每支l0ml.含黄芩甙200mg,茵陈提取物60mg.栀子提取物32mg.北京第四制药厂生产),地塞米松磷酸钠注射液(5mg/ml,江苏天晴制药总厂生产)。
1.3 主要试剂 苯巴比妥,上海化学试剂采购供应站分装厂产品;胆红素、尿嘧啶二磷酸葡萄糖醛酸(UDP-GA).为美国Sigma产品;洋地黄皂甙,德国麦克公司产品;牛血清白蛋白,卫生部生物制品所产品。
1.4 大鼠肝酶诱导模型 将96只大鼠随机分为4组.每组24只并分别腹腔注射不同药物。每日药物及剂量分别为:对照组(生理盐水30ml/kg).苯巴比妥组(阳性对照组,75mg/kg).茵栀黄组(30ml/kg).地塞米松组(10mg/kg)。每天1次.连续注射3天、5天、7天。分别于设定时间末次注射后24h.每组每次各拉颈处死8只大鼠,摘取肝脏。
1.5 肝UDPGT活性测定 摘取肝脏后立即用生理盐水冲诜.定量滤纸吸干后取肝右叶0.5g.置5ml匀浆管中加入5ml/250mM蔗糖溶液(pH=7.40).电子恒速搅拌仪匀浆3分钟(1200转/分).制成10%(w/V)的肝匀浆。取10%肝匀浆lml.加2%洋地黄皂甙蔗糖溶液1mI(pH=7.4).即制备成已活化的酶待测标本。以上操作均在4 C以下进行.UDPGT活性测定参照Black法[1].反应液组成为:0.17lμm胆红素,5μm氯化镁.20μm三乙醇胺一盐酸缓冲液(pH=7.4). 1.67μmUDPGA。加入200μl酶待测标本.置37C水裕恒温振荡器内孵育30分钟后.加入l m1甘氨酸一盐酸缓冲液(pH=2.8)终止酶促反应。室温放置5分钟,加入Iml偶氨试剂提取偶氯化台物.然后37 C振荡保温30分钟后取出.加入0.5ml7%抗坏血酸终止倜氯反应,并加入5ml二戊酮一乙酸丁酯混台液(85:l 5.V/V).机械振荡30分钟以提取偶氮化色素(结台胆红素).常温下1000g离心5分钟.取其上清液,以530nm波长比色测定吸光度。UDPGT活性单位以在37 C、每分钟每克肝匀浆蛋白催化生成的结台胆红素的μmol数表示:μmol,g protein/min。蛋白质测定采用Lowry氏方法[1],牛血清蛋白为标准蛋白,
1.6 计算大鼠相时肝脏重量 按肝重/体重x100%计算肝/体重比。
1.7 统计学处理 采用华西医科大学研制的PEMA统计软件包作方差分析、q检验。