Vent (Thermococcus litoralis)
Vent聚合酶有3'-5'外切酶较读功能,因此比Taq等聚合酶有相对高的可信性。注意,当延伸的长度大于2kb时,往往要使用超过2mM的Mg离子浓度。而当延伸长度小于2kb时,长度和Mg离子水平间不存在相关性。当模板链上存在次黄苷酸或脱氧尿苷时,阻止聚合酶的延伸。
建议使用的PCR试剂和已知的特性:
dNTPs: 200µM - 400 µM
Mg2+: 1.5 mM - 7.5 mM
盐: 10 mM KCl, 10 mM (NH4)2SO4
pH: 8.5
缓冲液: 20 mM Tris-HCl, pH 8.8
添加剂: Triton X-100
错误率:
2.4 x 10-5 errors/bp (Cariello et al., 1991)
4.5 x 10-5 errors/bp (Ling et al., 1991)
5.7 x 10-5 errors/bp (Matilla et al., 1991)
效率/循环: 70%
Deep Vent (Pyrococcus species GB-D)
Deep Vent酶对高温和低温都具有极端的稳定性,并耐受多种潜溶剂,例如甲酰胺和DMSO。能产生长的延伸链,最长达到14kb。Deep Vent比Vent的外切酶活性高四倍,比Taq的活性高5-15倍。注意延伸超过2kb的链时,需要的Mg离子浓度一般要超过2mM。而当延伸长度小于2kb时,长度和Mg离子水平间不存在相关性。当模板链上存在次黄苷酸或脱氧尿苷时,阻止聚合酶的延伸。
建议使用的PCR试剂和已知的特性:
Mg2+: 2 mM - 6 mM
盐: 10 mM KCl, 10 mM (NH4)2SO4
缓冲液: 20 mM Tris-HCl, pH 8.8
添加剂: Triton X-100
错误率:
New England Biolabs公司表明大约是Vent酶的两倍 (2.4 - 5.7 x 10-5 错误/bp)
UlTma (Thermotoga maritima)
UlTma是一种高保真的DNA聚合酶,当模板长度<=3kb时,可提高高的产物产率。产生平末端的PCR产物。
建议使用的PCR试剂和已知的特性:
dNTPs: 40µM
Mg++: 1.5 - 2.0 mM
盐: 10 - 35 mM KCl
pH: 8.3 - 9.2
缓冲液: 10 mM Tris-HCl, pH 8.8
添加剂: Tween 20
延伸: 72° C - 80° C
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