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第二部分 灌注取脑

流程：1）麻醉；2）开胸；3）心脏左心室穿针，剪开右心耳；4）生理盐水冲水；5）4%多基甲醛固定；6）取脑；7）保存或切片。

1、多聚甲醛的配置：

一般方法为：4%多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装有500ml DEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH值至7.0，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。

我们用的方法：加热至60～65℃固然融解的快，不过容易挥发，气味难闻，不是好的选者。我们是这样做的，感觉不错，在此强烈推荐：先配好pbs，称好相应的多聚甲醛，37c水浴或温箱密封放置2天，就能全溶。

2、灌注所用器皿：一般用输液瓶及输液管，为了提高灌注速度可以用较大号的针头及增加灌注压力。

3、麻醉后开胸：暴露充分些容易心脏穿刺及剪开右心耳。箭头所指为右心耳。

4、心尖插入灌注针头，剪开右心耳，开放静脉血。

5、夹闭腹主动脉：只灌注上肢及头脑，固定的好又快，又省多聚甲醛。多聚甲醛用100ml以下即可。

6、先灌注生理盐水约100ml，见到老鼠两前肢及两肺变白可改灌注多聚甲醛。

7、灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠前肢剧烈抽动（下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全）；前肢及颈部僵硬；所灌注的脑组织白而硬。