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人胚胎干细胞/多能诱导干细胞

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发布日期:2012-06-16 13:18 文章来源:丁香园
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关键词: 人胚胎干细胞 多能诱导干细胞 生物专题 丁香园 丁香通 百通生物   点击次数:


人多能干细胞一般被定义为能够保持正常染色体核型并能无限扩增的细胞。它们具有生成内、中、外三个胚层的能力,并可以进一步分化为特定的细胞谱系。这促使了它们在各种临床以及人体细胞和发育系统研究领域的应用。主要包括两类: 人胚胎干细胞(hPSCs)和人诱导多能干细胞(hiPSCs)。

有两种主要的途径制备多能干细胞:(1)分离人早期囊胚内细胞层,合适条件下培养,构建人胚胎干细胞(hESC);(2)使体细胞表达特定的转录因子,经过特殊条件培养,体细胞反分化为诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSC)。

诱导多能干细胞研究过程:



1.    重编程

从成体细胞向多能诱导干细胞重编程的方法: 慢病毒转染,细胞因子诱导,质粒转染。

相关诱导因子包括:Oct3/4,Sox2,Klf-4,c-Myc,后来科学家们陆续也研究了几种诱导因子的组合,包括Oct3/4,Sox2,Nanog等,这些因子的组合,也能用于将成体细胞重编程为多能诱导干细胞。

杭州百通生物技术有限公司可提供的相关产品:STEMcirclesTM-LGNSO。

STEMcirclesTM-LGNSO小段DNA环含有4个反分化体细胞的因子:LIN28,NANOG,SOX2和OCT3/4以及一个绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)作为报告基因。与常规的DNA质粒不同,STEMcirclesTM-LGNSO载体不包含细菌DNA,因此可以避开细胞为抵御外来DNA所具有的沉默机制。结果是基因表达更加稳定持久,重编程效果也比常规DNA质粒的方法更好。这种非病毒、

优点:操作简单易行,转染效率高,基因表达持久,获得的iPS细胞更安全。

2.    培养和冻存

目前,ES/iPS细胞的培养方法主要有两种,在饲养层上培养(feeder-dependent)和无饲养层上培养(feeder-free)。杭州百通生物技术有限公司可提供的相关产品主要为

2.1.    mTeSRTM1和TeSRTM2,其中 mTeSRTM1是成分确定,用于无饲养层细胞的条件下维持人多能干细胞的培养基,基于Ludwig等人的研究成果,是完全的、成分确定的无血清培养基,其开发得到WiCell Research Insititute的授权。而TeSRTM2则是不含动物蛋白、成分确定,用于无饲养层细胞的条件下的维持人多能干细胞的培养基,因其不含动物蛋白,因此较多应用于再生医学以及临床研究等领域。

2.2.    StemAdhere:由Primorigen Biosciences公司研发生产的一种成分确定的人源性基质,用于支持对人多能干细胞(hPSCs)的长期培养。它可以替代常用的Matrigel与mTeSRTM1或TeSRTM2配合使用,构建成分完全确定的无饲养层培养体系。

2.3.    mFreSR和CryoSto CS10:常规使用胎牛血清的方法冻存人多能干细胞,会将不确定的成分引入培养基当中。mFreSR是成分确定,为hESCs和hiPSCs特别设计的冻存液,与其他已知方法相比,其复苏效率提高了5到10倍。CryoSto CS10是用于人多能干细胞,以cGMP级别标准生产、无动物蛋白的冷冻保存液。将这两种无血清冻存液与我们无需饲养层细胞的培养基

3.    分离和鉴定

用于鉴定的抗体

可提供的相关产品:

#1550/#1551    抗Oct3/4抗体    

#01552    抗SSEA-1抗体    

#01553    抗SSEA-3抗体    

#01554    抗SSEA-4抗体    

#01555    抗TRA-1-60抗体    

#01556    抗TRA-1-81抗体    

#01557    抗TRA-2-49抗体    

#01558    抗TRA-2-54抗体    

#10210    FITC标记的羊抗鼠IgG    

#10211    FITC标记的羊抗鼠IgM    

#10215    APC标记的羊抗大鼠IgM    

4.    形成类胚体

很多用hESC和hiPSC进行分化实验的方法,均开始形成于类胚体的多细胞三维聚集体。传统用于形成EB的方法包括:

a.    切割法:直接用移液器枪头将贴壁的胚胎干细胞/多能干细胞切割成较均匀的小块,然后用合适的培养基培养后形成类胚体。此种方法所形成的EB大小和性状均不能控制。

b.    悬滴法:将数量相等的ES/iPS细胞接种在培养皿盖上后,翻转培养皿盖,使得培养皿盖上的细胞滴落在培养皿中,培养形成EB。此种方法效率很低,一次所制作的EB数量有限。

c.    比较方便的方法是使用AggreWell板来制作类胚体,将合适数量的ES/iPS细胞加至AggreWell培养板中,离心使其均匀分布后,培养即可形成大小性状一致的EB。此种方法所制作的EB重复性好,且效率高。

可提供的相关产品:

AggreWell 400培养板,AggreWell 800培养板,AggreWell 400Ex培养板。

5.    分化

可提供的相关产品:

STEMdiff APEL培养基:添加特定谱系生长因子后可用于分化

STEMdiff神经诱导培养基:可用于ES/iPS向神经方向的分化诱导,其效率可达99%

STEMdiff神经花环分选试剂:可用于任何神经分化体系中神经花环的挑选试剂

5月上市   STEMdiff Hematopoietic Differentiation Kit(hPSC向造血分化试剂盒)

5月上市   STEMdiff Definite Endoderm Differentiation Kit(hPSC向定向内胚层分化试剂盒)

7月上市   STEMdiff Cardiomyocyte Differentiation Kit(hPSC向心肌分化的试剂盒)
 

编辑: gaowei2010

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