miRNA功能研究
Q:转染miRNA mimic和inhibitor如何确定转染率?
A:最直接的方法为加设转染对照,直接观察转染率。
Q: miRNA mimic和inhibitor转染时的浓度是否一样?
A:由于miRNA inhibitor其竞争抑制性的作用机制,其往往需要较大的用量才能观察到预期的抑制效果,则相当于mimic的几倍用量。推荐的mimics转染浓度为50nM,inhibitor转染浓度为100nM。
Q:多个miRNA的共转染怎么做?
A:根据每个miRNA的转染浓度取量,按照常规的方法转染即可。
Q:miRNA mimic实验结果不能重复?
A:可能与miRNA表达及作用的时空特异性相关。
Q:miRNA agomir/antagomir针对不同的器官如何给药?给药的推荐量是多大?给药频率是多少?
A:给药方法大致分为系统给药(如静脉给药、腹腔给药等)和局部给药(如皮下注射,玻璃体给药,鞘内给药等)。给药方法的选择需要根据不同的器官来选择,而给药量因不同的给药量而异。如肝脏、肾脏常用静脉注射(系统给药);而皮下肿瘤则常用到瘤内注射(局部给药)。系统给药: agomir每次注射5~20nmol/20g体重, antagomir每次注射50~200nmol/20g体重;局部给药: agomir每次注射1~5nmol,antagomir每次注射5-20nmol。给药频率往往是一周2~3次。
Q:miRNA inhibitor及其miRNA antagomir的区别是什么?该如何选择?
A:miRNA inhibitor和antagomir都用于抑制miRNA的功能研究,二者的区别也主要在修饰方式上。细胞实验可以二者选择其一,而动物实验选择antagomir相对比较有优势
编辑: gaowei2010