转基因小鼠F0的制作
发布日期：2010-04-08 17:37 文章来源：<a href='http://www.dxy.cn'>丁香园</a>
关键词： 转基因小鼠
F0
DNA制备
外源基因
假孕受体鼠
显微注射
点击次数：
转基因小鼠的制作大致可分为以下几个部分：
1. 用于原核显微注射的DNA的制备：一般是线性化的且经过电泳纯化，凝胶回收，及进一步沉淀纯化，其工作浓度一般为1-5ng/μl。此处DNA的纯度和浓度对后续的成功率影响较大，需谨慎操作。
2. 同步获得供体雌鼠（注射激素的雌鼠与正常雄鼠交配而得）和假孕受体母鼠（正常雌鼠与结扎雄鼠交配产生)。供体鼠用于收集注射用受精卵，而假孕受体母鼠用于孕育注射后存活的受精卵，最后产出F0代转基因小鼠。
3. 供体鼠注射绒毛膜促性腺激素后，采集细胞核清晰的原核受精卵。绒毛膜促性腺激素可使得雌鼠排卵数量是正常排卵数量的2倍。显微注射的受精卵最好于交配后次晨注射前几小时收集，此时易进行注射操作。
4. 用显微注射法将纯化的外源基因注射进受精卵的原核内。工作液中受精卵可能成团状，显微注射用的受精卵必须是单个细胞，而且无细胞碎片。如不符合该标准，需用透明质酸酶进行消化，随后漂洗干净。
原核显微注射过程图片，本照片由赛业（广州）生物科技有限公司提供
5. 受精卵鉴定 ，将存活受精卵或存活胚胎移植到同步交配的假孕母鼠的输卵管(或子宫)内，饲养后鉴定是否受孕以及个体发育状况。
6. 子代鼠外源基因整合和表达的检测。产出的鼠仔中，属转基因小鼠者，约占全部小鼠的20％-30％。因此，对转基因小鼠必须进行鉴定筛选。较常用的鉴定基因是否整合的方法有PCR法及Southern杂交法。而Northern杂交，RT-PCR检测，Western杂交，免疫组织化学法则被用来检测转入基因的蛋白表达状况。
7. 转基因小鼠品系的建立。
以上部分，除了涉及到显微注射外，还设计到多项精细操作，如公鼠结扎，母体内分离获得受精卵，受精卵移植等动物实验。步骤繁琐，实验准备细致，同时还需要具备动物生理，解剖知识以及分子生物学原理和操作知识，短时间内很难建立一个稳定高效的平台。
编辑: yishuitan 作者:丁香园通讯员