RNA抽提细节系列
不少的文献都说，用LiCl 沉淀RNA有很多好处，比如只沉淀RNA,不会沉淀DNA、蛋白和多糖等。但就是操作比较麻烦，比如，过夜沉淀，不能沉淀小分子RNA等。下面就LiCl 沉淀方法的误区进行探讨。
误区一：LiCl 不能沉淀小分子RNA.很多文献都说LiCl 沉淀的RNA不含小分子的5s rRNA和tRNA.但，事实是这样吗？至少在我的实验中发现LiCl 可以沉淀小分子RNA.下面的图片更能说明LiCl 可以沉淀小分子RNA.泳道1是RNA maker,泳道2、3、4是用LiCl 沉淀的RNA.当然LiCl 沉淀tRNA的效果真的不好，其原因可能是tRNA的高度二级结构。
误区二：LiCl 沉淀需要长时间和低温。不少文献上说LiCl 沉淀需要4度、-20度、甚至-80度下放置1小时、2小时、甚至过夜，其操作极其繁杂。但是，LiCl 沉淀真的需要长时间和低温吗？让我们来看看下面的数据：
Lane 1, RNA marker.
Lane 2, RNA centrifutged immediately without chilling.
Lane 3, RNA chilled at -20°C for 30 minutes before centrifugation.
Lane 4, RNA incubated at 25°C for 30 minutes to test precipitation time independently of chilling.
Lane 5, RNA chilled at -20°C for 1 hour.
Lane 6, RNA incubated at 25°C for 1 hour.
图片显示放置30min后，RNA沉淀比不放置更有效（请比较泳道2和3），但是比较泳道3、4、5、6后，你会发现在-20度下沉淀与在25度下沉淀没有区别，放置30min与放置1小时沉淀没有区别。
但是建议大家用 -20°C + 30 minutes 的沉淀方法，因为低温能降低RNases的活性（假设有痕量的RNase残留）
小提示：任何事务有利便有弊，LiCl 沉淀与乙醇沉淀相比，它的沉淀效率稍低。数据显示2.5M的LiCl 的平均沉淀率是74%,而乙醇则是85%.通俗的说乙醇沉淀可以得到更多的RNA。
编辑: ludongcn 作者:eagleeden
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