核酸抽提：七零八碎的实验数据和推理
1. 苯酚保存条件的实验
苯酚的保存条件，正统的说法：避光、4C、上覆一层液体、密闭，可保存1个月。
下面是我的一个实验：
3月10日，取Tris饱和苯酚（加入beta-Mercaptoethanol抗氧化）到6个透明1.5ml离心管中，其中3管再覆盖少量液体。取一管未加液体的和一管加液体的放入4C冰箱，其余4管置于室温。室温的4管有两管（加液和不加液各一管）用刀子将离心管盖子钻了一个洞，使之与空气接触。没10天观察一次颜色变化，直到7月20日（130天）。
现象：直到6月20日，所有的苯酚都没有发生颜色的变化；尽管此时钻洞的离心管上清已经没有了，苯酚液减少了。到7月时，室温钻孔的颜色开始有一点变化了，其它的几乎无。
结论：苯酚的稳定性最相关的是空气，温度、光线都只是氧化反应的加速因素。
应用：确保苯酚稳定的关键，是将苯酚分装成小包装。包装大小控制在1个月用完的程度。500ml苯酚可以分装到100ml瓶子中，用Parafilm封住暂时不用的。用完一瓶再开另外一瓶。如果有塑料瓶，-20C保存则更好；玻璃瓶千万不可-20C保存，否则比破。
（本实验的前提是，苯酚本身质量是合格的）
2. EDTA的OD值
EDTA在核酸，尤其是DNA的溶解中广泛使用，Ambian也提到EDTA可以提升A260/280值。后者不是我关心的，我关心的是为什么EDTA会对OD值有影响以及如何影响。
实验：以水为空白，测定EDTA的OD值
EDTA浓度（uM）：12/120/335/500
A230：0.006/0.073/0.207/0.313
A260：0/0/0.005/0.007
A280：0/0/0/0
结论：以水为对照，5mMTris以及低于此浓度时，A230-A280读数几乎是0，所以，谈论TE溶解就可以简化为E溶解。TE溶解的DNA，EDTA一般为1mM，10倍稀释则为100uM。此时，如果以Tris作为对照，你就没有必要去测定A260/A230了，因为A230由EDTA的贡献可不小。如果你溶解核酸的溶液含EDTA，一定要使用该溶解液作为测定空白和稀释的溶液，否则，NBA明星的广告词非常适合：youwerefooled.
编辑: ludongcn 作者:上海孤儿
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