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FRET:指荧光共振能量转移,在供体和受体相互靠得很近时,光子能从一个受激发的荧光团(供体)转移到另一个荧光团(受体),并使后者发出荧光。
HTRF:均相时间分辨荧光,Homogeneous Time-Resolved Fluorescence )是用来检测纯液相体系中待测物的一种常用方法。
背景(Background):指在没有加入compound时检测到的信号值。
荧光受体(acceptor):指在荧光团受到激光激发时,能发出特定波长的发射光的基团。HTRF®的能量受体均可为XL665和d2。
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HTRF术语详解
FRET:指荧光共振能量转移,在供体和受体相互靠得很近时,光子能从一个受激发的荧光团(供体)转移到另一个荧光团(受体),并使后者发出荧光。
HTRF:均相时间分辨荧光,Homogeneous Time-Resolved Fluorescence )是用来检测纯液相体系中待测物的一种常用方法。
背景(Background):指在没有加入compound时检测到的信号值。
信噪比(signal ratio):指在加入compound之后获得的荧光信号值与背景信号值之间的比率。为了便于计算和读书,在HTRF仪器上,该比率均被乘以10000。
荧光供体(donor):是一种荧光集团,其在被外来能源激发(例如闪光灯或激光)时,如果它与受体在足够近的距离之内,可以将能量共振转移到受体上。HTRF®的供体是铕穴状化合物(Eu3+cryptate)或Lumi4™铽穴状化合物(Tb2+cryptate)
荧光受体(acceptor):指在荧光团受到激光激发时,能发出特定波长的发射光的基团。HTRF®的能量受体均可为XL665和d2。
Cryptate(简称K):穴状化合物结构
Chelate:螯合物结构
Eu:全称Europium,是镧系元素铕。
Tb:是镧系元素铽,是近年Cisbio公司与Lumiphore公司合作的结果,激发效率更高。
Z':国际上一种计算系统偏差的通用指标,其公式为
XL665:HTRF中的传统acceptor,是改良过的别藻蓝蛋白(APC),将 APC的亚基偶联,增加了稳定性。激发波长为 620nm,发射波长为665nm,位于红外光区,进一步降低了生物溶液对实验的影响(生物学成分很少在红外光区有自发荧光)。
D2:是在XL665后研发的第二代acceptor,为合成蛋白,光谱学特征与XL665相同,但是分子量较小,约为1KD,可减少空间位阻对实验的影响。
编辑: cq