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miRNA研究解决方案
美国GeneCopoeia公司是目前全球最大的基因和miRNA功能研究材料供应商之一，为客户提供全球最多的人类编码全长蛋白的ORF克隆。这些ORF构建在具有不同特征的多套载体中，使这些克隆易于在多种不同类型的细胞及无细胞转录翻译偶联体系中进行功能分析、蛋白质表达和纯化、大规模功能基因组学和蛋白质组学研究。 GeneCopoeia关注miRNA研究领域多年，基于自身强大的专业技术与完善的基因功能研究 。
miRNA表达量差异分析
miRNA功能获得
miRNA功能缺失
miRNA功能回复与确证
使用RNAi治疗人体疾病的临床试验
siRNA作为一种新兴的治疗技术，却已经以一种前所未有的速度迈进了临床试验阶段。下面，我们将介绍几种已经进入临床试验阶段的人体疾病RNAi疗法。
第一个被siRNA治疗指南批准获得临床研究新药（investigational new drug，IND）资格，并且进入了临床试验的就是Bevasiranib，它是美国Acuity制药公司生产的针对血管内皮细胞生长因子（VEGF）的siRNA类药物。该药主要用于治疗渗出性老年性黄斑变性（详表2）。所谓渗出性老年性黄斑变性，主要是因为视网膜后血管大量生长，导致患者出现严重的不可逆性视力损伤。单是美国大约就有160万人受该病困扰。据估计，到2013年，全球患病人数将达到1100万。在小鼠试验中对Bevasiranib进行的临床前研究表明，直接眼部注射该药能够下调Vegf基因的表达，有效减少新生血管数量。目前，Bevasiranib在治疗渗出性老年性黄斑变性方面已经进入了III期临床试验，同时还在治疗糖尿病黄斑水肿方面进入了II期临床试验。待这些临床试验结束时累计将有数百名患者可接受Bevasiranib的治疗。
还有两家公司也专注于用siRNA治疗黄斑变性疾病，他们分别是美国的Merck’s Sirna Therapeutics公司（主要产品是针对VEGF受体VEGFR1蛋白的Sirna-027）和Quark制药公司。他们和伦敦及柏林的Silence Therapeutics公司（即以前的SR制药公司）合作，主要生产靶定RTP801基因（又名DDIT4基因，该基因与黄斑变性疾病的进展有关）这种缺氧诱导基因的siRNA产品RTP801i-14。RTP801i-14已经被授权给英国的Prizer制药公司，进行I/IIA期临床试验。Quark制药公司也已经获得了IND资格可以进行另一项临床前试验，他们目前正在为这项实验招募志愿者。这项实验的药物靶定TP53基因的siRNA。该药通过抑制p53蛋白的表达能够阻碍细胞凋亡通路，从而有望避免手术后出现的急性肾衰竭。
与此同时，美国的Calando制药公司也开始了一项I期临床试验项目。他们实验的新药是用于治疗实体瘤的靶定核糖核苷酸还原酶RRM2（该酶参与DNA的合成）亚基的siRNA。值得一提的是，这是第一项使用受体介导递送方式的siRNA临床试验，该产品被连接有转铁蛋白的环糊精颗粒包裹。这样，药物就只会被细胞表面表达有转铁蛋白受体的细胞摄取，而转铁蛋白受体在肿瘤细胞表面表达量就非常高。
Acuity制药公司与Merck公司旗下的Sirna Therapeutics公司合作进行的临床药物试验成功地稳定了患者的病情，阻止了病情进一步加重，明显改善了患者的视力，而且还没有副作用和不良反应。这些成果让我们对玻璃体内注射siRNA这种治疗方法充满了信心。但是，Kleinman等人的报道给我们当头泼了一盆冷水。Kleinman等人认为，患者新生血管数量的减少并不是因为siRNA特异性的基因沉默作用，而是因为它非特异性地激活了TLR3受体，继而导致γ干扰素和白介素12活化，从而下调了VEGF因子的表达。换句话来说，特异性的siRNA药物和非特异性的siRNA对照药物都能因为siRNA与TLR3之间的相互作用而产生这种非特异性的血管生成抑制作用。而且，这种非特异性的效应与细胞对siRNA分子的摄取作用无关，同时由于TLR3蛋白参与细胞内多条信号通路，因此这也让我们对siRNA疗法的安全性问题感到了担忧。
美国Alnylam制药公司是一家专业的siRNA制药公司，他们的主打产品ALN-RSV01目前已经进入了II期临床试验。ALN-RSV01主要针对呼吸道合胞病毒感染（在美国每年有大约30万人会感染呼吸道合胞病毒）。它可以沉默病毒复制过程中必需的病毒核衣壳蛋白编码基因N基因。ALN-RSV01也是第一款进入临床试验的抗病毒siRNA产品，目前人们已经计划将试验对象扩展到儿科患者。就现有的试验结果来看，ALN-RSV01的疗效非常好，而且志愿者对它的耐受性也非常高。最近，Alnylam制药公司又与Kyowa Hakko Kogyo结成了独家合作关系，共同在日本和其他亚洲国家研发商业化的ALN-RSV01产品。
Alnylam制药公司同时也在开发一系列治疗高胆固醇血症、亨廷顿舞蹈病（与美国Medtronic共同开发）、丙型肝炎病毒（与美国Isis制药公司共同开发）、进行性多病灶脑白质病（与美国Biogen Idec公司共同开发）以及流感（与瑞士Novartis制药公司共同开发）等疾病的siRNA产品。
国际雅-雷二氏综合征协会（The International Pachyonychia Congenita Consortium，IPCC）也正与美国TransDerm公司合作，共同开发治疗雅-雷二氏综合征的siRNA产品。他们希望该产品能够“纠正”患者角蛋白的合成，从而达到治疗这种罕见的皮肤疾病的目的。
美国希望之城医疗中心（The City of Hope National Medical Center）正在与澳大利亚Benitec公司合作开发一款治疗艾滋病淋巴瘤的药物，目前已经进入了I期临床试验。该药物是一款使用了Pol III启动子载体的shRNA类药物，主要靶定HIV病毒的tat基因和rev基因的共有外显子序列。它使用的载体是基于HIV病毒的一种慢病毒载体，同时在载体上还插入了另外两个RNA抗HIV基因，最后通过该载体将shRNA基因导入血液干细胞。在临床试验中，通过自体骨髓移植方式将这种经过基因改造的血液干细胞输入HIV病毒感染患者体内，看看是否能够起到治疗艾滋病相关骨髓瘤的作用。到目前为止已经有四位患者接受了这种治疗。
正如前面提到的那样，在siRNA药物研发领域合作已成为非常普遍的现象。通过合作可以获得更多的好处，比如获得更多的科研资金，缩短最后药物成品上市的时间等等。
有一些公司，比如美国Regulus Therapeutics公司等则将目光投向了miRNA。丹麦Santaris制药公司最近也开始为他们靶定人体miRNA分子（miR-122）的新药开始了I期临床试验项目。在该项药物试验里，miR-122是被下调的靶标，被试验的药物是抗miRNA的锁核酸药物SPC3649。锁核酸是一种骨架被修饰过的寡核苷酸分子，经过修饰之后它能更好地与底物杂交，避免底物被核酸酶降解。SPC3649最终的目的是希望能够治疗丙型肝炎患者，因为miR-122可以促进丙型肝炎病毒复制。下调miR-122分子还能用于治疗高胆固醇血症患者。直接靶定在心脏里表达的miRNA分子，比如miR-208（它能够调控心脏肥大和纤维化）等也会达到治疗目的，因为在医疗实践中早就发现直接往靶器官里给药是可行的。
miRNA功能的获得或缺失与各种疾病的发生发展都有着密切的关系。蛋白质功能既可以直接也可以间接地受miRNA分子的调控，因此，miRNA表达水平的些许改变也会对基因表达调控带来巨大的影响。在因为miRNA表达水平改变而造成的疾病中，我们可以设想是否如此，如果能使miRNA表达水平恢复正常，那么就应该能够治愈该疾病呢？那么如果是这样，当miRNA表达水平过高时我们就对其进行针对性下调，如果表达水平过低我们就往细胞内注入一些类似的miRNA模拟物。不过要达到这个目的，我们现有的小RNA递送系统的特异性和有效性都还有待提高。另外，要想对目标miRNA分子表达水平进行精细、准确的调控并非一件容易的工作，而且人们现在还不清楚能否精确地只对一个miRNA分子施加影响而不会“伤及”同一miRNA分子家族中的其它成员。
在实际治疗时，不论是上调还是下调miRNA的功能，我们都还应该考虑到miRNA分子调控机制的复杂程度。要知道一个miRNA分子就可以调控数百个蛋白质的表达水平，因此我们哪怕对一个miRNA分子进行调控也要特别小心。
编辑: helen
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