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1、免疫组化脱片产生的原因？
（1）多聚赖氨酸玻片质量有问题。
（2）组织切的不好，切片机的问题或者切片厚度不均匀。
（3）组织自身有坏死。
（4）片子没烤好，时间短、温度不够。
（5）操作的时候用力甩片会促使粘贴不牢固的组织片脱落。
（6）抗原修复的时候高压时间过长或者放进修复液时手法不好容易导致脱片。此外，用EDTA修复比柠檬酸容易脱片。
（7）用PBS的时候尽量泡片，不要冲。
2、封闭血清的选择原则是什么？
为了防止组织或细胞切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性！实验前应用血清进行封闭。封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景。也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能与一抗来源一致。
免疫组化ABC法操作流程
1、4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）过夜，蜡块制作，切片，贴片。0.01M PBS清洗5min×3次；
2、脱蜡、水化：用二甲苯两次10min，用梯度乙醇由低浓度到高浓度进行水化；
3、加入0.3%的过氧化氢甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01M PBS 100ml＋30%过氧化氢）30min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01M PBS清洗5min×3次；
4、加入0.3% Triton X-100（0.3ml Triton X-100＋0.01 M PBS 100ml）30min，以增加细胞的通透性，0.01M PBS清洗5min×3次；
5、加入用血清稀释液（牛血清白蛋白1.00g＋0.01M PBS 100ml＋叠氮纳0.08g）稀释的一抗，4℃存放24-48h。吸去抗体，0.01M PBS洗5min×3次；
6、加入0.01M PBS稀释的的二抗，室温孵育2h。0.01M PBS洗5min×3次；
7、加入ABC复合物之类的抗体，室温孵育2h，0.01M PBS洗5min×3次；蒸馏水迅速冲三次；
8、加入显色液，进行免疫组织化学显色，时间一般3~10min，可不时在显微镜下进行观察，待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液，用蒸馏水迅速冲三次后加入0.01M PBS终止反应；
9、苏木素复染；
10、梯度酒精脱水之后，透明，封片，拍照。
编辑: gaowei2010
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