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1、免疫组化脱片产生的原因？
（1）多聚赖氨酸玻片质量有问题。
（2）组织切的不好，切片机的问题或者切片厚度不均匀。
（3）组织自身有坏死。
（4）片子没烤好，时间短、温度不够。
（5）操作的时候用力甩片会促使粘贴不牢固的组织片脱落。
（6）抗原修复的时候高压时间过长或者放进修复液时手法不好容易导致脱片。此外，用EDTA修复比柠檬酸容易脱片。
（7）用PBS的时候尽量泡片，不要冲。
2、封闭血清的选择原则是什么？
为了防止组织或细胞切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性！实验前应用血清进行封闭。封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景。也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能与一抗来源一致。
石蜡切片与冰冻切片的区别
一、组织和细胞标本类型：
（一） 组织标本类：
1、 石蜡切片：组织形态保存好
2、 冰冻切片：抗原性保存好
（二）细胞标本类：
1、组织印片 2、细胞培养片（细胞爬片） 3、细胞涂片
二、组织取材
1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后固定。
2、组织取材注意事项：
（1）标本新鲜：组织要求离体后30min~2h内浸入固定液，尤其是开展分子生物学工作。动物组织取材要求心脏还在跳动时取材。
（2）注意防止人为因素的影响 刀和剪要快，避免挤压。
（3）组织块的大小 厚为0.1~0.3cm，大小可根据需要而定。
三、活细胞标本的制备法
（1）细胞大量培养后，经消化将细胞制成悬液（106）涂在涂有切片粘合剂的载玻片上，凉干后固定。
（2）将细胞直接培养在盖玻片上。
（3）将细胞直接培养在6孔或9孔板上，经固定后可行IHC。
四、石蜡切片的制备
1、由于石蜡不溶于水和醇类试剂，只溶解在二甲苯类试剂中。因而，组织经固定和水洗后含大量水分，需用乙醇类试剂进行脱水，水脱完后，组织内含有大量的乙醇，还必须用能溶解乙醇的二甲苯来置换，最后经浸蜡，组织细胞内被大量石蜡支称，才使组织能用于石蜡切片。
2、小动物组织脱水、透明和浸蜡时间
75%乙醇30min，85%乙醇30min，95%乙醇Ⅰ1h，Ⅱ1h，Ⅲ过夜或2h；无水乙醇Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各30min；二甲苯Ⅰ15min， Ⅱ10min，Ⅲ10min；石蜡Ⅰ30min，石蜡Ⅱ30min，石蜡Ⅲ1~2h。
五、冰冻切片的保存和使用
1、冰冻切片固定后-80℃保存备用
2 、冰冻切片从-80℃取出，凉干或电吹风吹干后可直接进行免疫组化标记。
编辑: gaowei2010
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