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1、免疫组化脱片产生的原因?
(1)多聚赖氨酸玻片质量有问题。
(2)组织切的不好,切片机的问题或者切片厚度不均匀。
(3)组织自身有坏死。
(4)片子没烤好,时间短、温度不够。
(5)操作的时候用力甩片会促使粘贴不牢固的组织片脱落。
(6)抗原修复的时候高压时间过长或者放进修复液时手法不好容易导致脱片。此外,用EDTA修复比柠檬酸容易脱片。
(7)用PBS的时候尽量泡片,不要冲。
2、封闭血清的选择原则是什么?
为了防止组织或细胞切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体,造成后续结果的假阳性!实验前应用血清进行封闭。封闭血清一般是和二抗同一来源的,血清中动物自身的抗体,预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合,否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合,会造成背景。也可以用小牛血清、BSA、羊血清等,但不能与一抗来源一致。

免疫荧光与酶免疫组织化学方法的异同

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发布日期:2012-07-23 17:43 文章来源:丁香园
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关键词: 免疫组化 技术专题 义翘神州 丁香园 丁香通   点击次数:


1、概念和基本原理

免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定位、定性、半定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性和组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜的现像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质,并可在原位显示相应的基因和基因表达产物。免疫组织化学方法种类现已有:免疫荧光组织(细胞)化学技术、免疫酶组织(细胞)化学技术、亲和组织化学技术、免疫金银及铁标记免疫组织化学技术等。

免疫荧光组织(细胞)化学技术是采用荧光素标记的已知抗体(或抗原)作为探针,检测待测组织、细胞标本中的靶抗原(或抗体),形成的抗原抗体复合物上带有荧光素,在荧光显微镜下,由于受高压汞灯光源的紫外光照射,荧光素发出明亮的荧光,这样就可以分辨出抗原(或抗体)的所在位置及其性质,并可利用荧光定量技术计算抗原的含量,以达到对抗原物质定位、定性、半定量测定的目的。

2、标本制作

免疫荧光一般用冰冻切片,减少杂质干扰;而酶免疫组化一般用石蜡切片或冰冻切片均可以。

3、实验步骤

免疫荧光染色步骤简单,而酶免疫组化方法较为复杂,多了DAB显色过程、脱水等步骤。

4、染色后的标本保存

免疫荧光染色后的标本一般短时间拍照,时间长了荧光衰退,建议不要长期保存;而酶免疫组化染色切片经过脱水、透明和封片等可以长期保存。
 

编辑: gaowei2010

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