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兔单抗亲和力和灵敏度更高
相对于鼠单抗(解离常数Kd在10-9-10-10M水平),兔单抗的亲和力可提高100-1000倍(Kd在10-10-10-12M水平)。实际使用时,兔单抗的工作浓度更低,灵敏度更高,因此产生的背景更低,大大降低了假阳性的发生。用作免疫组化等用途时,有时甚至可免去抗原修复的步骤。

兔单抗能识别更多表位
很多蛋白在人类和啮齿动物中同源性很高,这些保守表位在小鼠体内免疫原性很弱,不容易产生高质量抗体。而兔做为宿主,可以更好地识别这些表位,产生针对更多表位的抗体。当然,兔也适合生产针对鼠类蛋白的抗体。

杂交瘤细胞的保存

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发布日期:2012-04-26 15:04 文章来源:丁香园
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关键词: 丁香园 丁香通 生物专题 义翘神州 细胞   点击次数:

(一)保存

当获得产生所需的单克隆抗体的杂交瘤细胞后,必须将一部分杂交瘤细胞保存,否则在连续传代的过程中,可能产生突变或染色体的漂移以至丧失固有特性或丢失产生抗体的特性。另外在长期的培养过程中,难免不发生污染以至于毁灭。所以必须冷藏保存一部分。保存方法如下:

1.材料

(1) 细胞:取对数生长期的细胞。

(2) 10%二甲基亚砜保护液(二甲基亚砜能损坏滤器,而又被高压所破坏,所以不能过滤或高压消毒。其本身就是毒品,无菌):含10%二甲基亚砜、20%灭活胎牛血清,70%RPMI—1640液。

(3) 20%FCS—1640培养液:含青霉素100U/ml,链霉素100μg/ml。

(4) 灭菌的2ml安瓶等

2.操作方法

(1) 去掉细胞培养瓶中的旧的培养液,加入10%FCS—1640液,使细胞悬浮。

(3) 1 000r/min离心10min,去上清。细胞沉淀用10%二甲基亚砜保护液制成悬液,使成1.0×107细胞/ml。

(3) 取样,台盼兰染色,计数活细胞,应在95%以上。

(4) 用注射器将细胞分装安瓶,每瓶0.5ml~1.0ml,熔封安瓶。

(5) 放4℃ 2h。

(6) 放液氮罐气态部分(-70℃)15h。

(7) 转入液氮部分。

(二)复苏

1.从液氮罐中取出安瓶立即放37℃水浴中速溶。

2.无菌操作打开安瓶,取出细胞悬液,转入组织培养瓶。

3.逐滴缓慢加入20%FCS-1640培养液3.5ml,这个过程延续3min。

4.5%CO2饱和湿度,37℃培养。

5.4h后弃去培养液上清,加入新鲜的20%FCS-1640培养液。

6.继续培养,换液,以至形成单层。

编辑: wangminchao

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