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兔单抗亲和力和灵敏度更高
相对于鼠单抗（解离常数Kd在10-9-10-10M水平），兔单抗的亲和力可提高100-1000倍（Kd在10-10-10-12M水平）。实际使用时，兔单抗的工作浓度更低，灵敏度更高，因此产生的背景更低，大大降低了假阳性的发生。用作免疫组化等用途时，有时甚至可免去抗原修复的步骤。
兔单抗能识别更多表位
很多蛋白在人类和啮齿动物中同源性很高，这些保守表位在小鼠体内免疫原性很弱，不容易产生高质量抗体。而兔做为宿主，可以更好地识别这些表位，产生针对更多表位的抗体。当然，兔也适合生产针对鼠类蛋白的抗体。
多克隆抗体的制备
多克隆抗体的制备
1. 器材：
剪刀（剪兔毛用）一把、弯头眼科手术镊子（游离血管用）一把、直头眼科手术剪（剪血管用）一把，手术刀架，手术刀片，注射器(1ml、10ml，25ml)附针头，兔子固定架，灭菌三角烧瓶(200ml)或平皿（直径18cm）、弯头止血钳四把，直头止血钳两把，手术缝合线，塑料放血管，纱布等。
2. 试剂：
生理盐水(或PBS)，
弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant, FCA） Sigma F-5881，
弗氏不完全佐剂(Freund’s incomplete adjuvant, FIA) Sigma F-5506，
二甲苯，酒精棉，脱脂棉，2% NaN3
3. 兔子的选择：
兔子的重量应在四斤以上，两耳光滑，明显可见耳静、动脉，健康。
4. Pre-bleeding：
抗原注射以前需要收集一些正常血清，已备检测抗体时作为阴性对照。待兔子在新环境中稳定，大概需要四天左右时间，可以进行耳动脉取血。取血量约5ml足矣。
免疫用的抗原必须纯化，否则影响抗体的质量。抗原经FCA或FIA充分乳化后才能注射。将抗原液与佐剂等比例混合后，置于混合器上使之剧烈振荡使抗原充分乳化，乳化过程比较费时、费力，但若乳化不充分，会影响免疫的效果，振荡后，1000rpm离心一分钟，如水相和油相不分层即可注射。首次免疫用FCA，以后都用FIA。
免疫方法可采用背部多点注射法。即于家兔脊柱两旁选4-6点皮下注射，每点注0.1ml，间隔2周后再于上述部位选不同点注射（不要选择临近位点，否则溃疡愈合不好）。每次免疫的抗原量约100μg。免疫次数在四五次即可，抗原用量大可以减少次数。
免疫一周后，可以耳动脉取血检测抗体效价。因为起初几次免疫产生的抗体的效价比较低，头两次取血，够检测用即可。在三次免疫后，可以获得较高效价的抗体，每次取血量可以在40ml，不要取太多，否则会造成兔子贫血。最后一次取血可以采用颈动脉放血，具体操作如下：
a.家兔仰卧于兔架上固定头部，用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤；
b.沿颈部中线用手术刀切开皮肤约10cm，分离皮下结缔组织，直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌（小心操作，如碰到小血管出血，可用止血钳止血）
c.用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织，暴露出颈总动脉后用弯头眼科镊使之游离，剥离神经和结缔组织；
d.于动脉下套入两根黑丝线，分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住；
e.用小拇指垫在血管下，用尖头眼科手术剪在两根丝线间的动脉璧上剪一小口（勿剪断），插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上，以防放血管滑脱；
f.松开止血钳，使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。
5. 血清的分离：
如果用三角瓶或平皿盛血，将器皿倾斜放置于37℃烘箱2hr，转移到4℃沉淀过夜，第二天早上用吸管吸取血清。如果用离心管收集，37℃烘箱放置2hr，转移到4℃沉淀过夜，第二天早上离心，10000RCF，10分钟。在血清中加入 NaN3 至终浓度0.02%，分装后-20℃保存。
编辑: wangminchao
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