丁香园 | 丁香通 | 人才 | 会议 | 药学 | 博客  
 点击次数:

你知道吗? 详细 >>

兔单抗亲和力和灵敏度更高
相对于鼠单抗(解离常数Kd在10-9-10-10M水平),兔单抗的亲和力可提高100-1000倍(Kd在10-10-10-12M水平)。实际使用时,兔单抗的工作浓度更低,灵敏度更高,因此产生的背景更低,大大降低了假阳性的发生。用作免疫组化等用途时,有时甚至可免去抗原修复的步骤。

兔单抗能识别更多表位
很多蛋白在人类和啮齿动物中同源性很高,这些保守表位在小鼠体内免疫原性很弱,不容易产生高质量抗体。而兔做为宿主,可以更好地识别这些表位,产生针对更多表位的抗体。当然,兔也适合生产针对鼠类蛋白的抗体。

抗体纯化:冷酒精沉淀法

转载请注明来自丁香园
发布日期:2012-04-27 10:39 文章来源:丁香园
分享到: 收藏夹 新浪微博 腾讯微博 开心网 豆瓣社区 人人网
关键词: 丁香通 生物专题 义翘神州 抗体纯化 沉淀法   点击次数:

1、 血清加3倍体积的蒸馏水,调节 pH至7.7(±)冷却到0℃。在激烈搅拌的条件下,加预冷的酒精(-20℃)到最终浓度为20%,保持在-5℃。产生的沉淀(a),含有大多数种类的免疫球蛋白。

2、 沉淀a悬浮于25倍体积的0.15~20mol/l NaCl溶液(冷)中,加有0.05mol/l醋酸调节 pH到5.1,产生的沉淀(b),包括大部分的IgA和IgM,IgG留在上清液内。

3、调节上清液的pH到7.4,加冷酒精(-20℃~-30℃)到最终浓度为25%,维持在-5℃。所得到的沉淀(c)含有90%~98% IgG。不同动物,IgG分离的条件和产量略有不同。见下表。

4、 从沉淀(b)可按下述方法进一步分离出IgA和IgM的混合物:将沉淀(b)悬浮在0℃ 水中,调节 pH到5.1,离心去除不溶的蛋白。调节 上清液离子强度到0.01~0.0075,pH5.5。然后加冷酒精到最终浓度为10%,保持在 –2℃或-3℃低温,所得的沉淀(b-b)主要含IgA和IgM。

物 种

 

pH

 

沉淀条件

IgG产量

酒精浓度(%)

离子强度

 

 

 

5.1

15.

0.01

65

山羊

5.2

0

0.01

65

家兔

5.2

10

0.01

70

大鼠

5.0

15

0.01

50

豚鼠

5.1

15

0.01

70

 

 

编辑: wangminchao

以下网友留言只代表网友个人观点,不代表网站观点