miRNA研究策略
miRNA作为一种重要的基因表达调控因子，其研究可从三方面入手：miRNA表达谱检测，miRNA靶点分析，miRNA功能筛选。
图1 miRNA研究的主要方法及切入点
miRNA研究领域特点
※miRNA功能研究（miRNA-靶点-细胞表型）
※miRNA与信号通路的关系（miRNA-靶点-信号通路）
※miRNA与重要基因的关系（靶基因-miRNA）
※miRNA与干细胞（miRNA-靶点-干细胞维持及分化）
※miRNA与肿瘤（肿瘤-miRNA-靶点）
※miRNA与白血病（白血病-miRNA-靶点）
※miRNA与生物的遗传发育（miRNA-靶点-遗传发育）
a) miRNA表达检测
● miRNA 的qRT-PCR检测
准确检测细胞或实验动物组织中miRNA的表达对研究者来说至关重要， 可帮助研究者更快地切入miRNA的功能研究，在病理组织或血液中的miRNA表达谱检测有助于分析miRNA与疾病的相关性，为开发miRNA作为疾病诊断及治疗生物标志物，和miRNA为基础的药物开发奠定基础。锐博生物针对miRBase19.0数据库中人、小鼠、大鼠所有的miRNA，设计 Bulge-Loop? miRNA qRT-PCR 引物套装，提供对细胞、组织或血液中的miRNA的qRT-PCR全套技术服务。
● miRNA表达谱芯片检测
miRNA芯片检测服务是检测总RNA样品中miRNA的表达谱。利用miRNA芯片以及总RNA (Total RNA) 为样品，进行一连串实验操作与资料分析，即可检测出数千miRNA表达谱，分析表达谱数据中出现差异与共表达的miRNA。
● miRNA深度测序
采用新一代测序技术平台，能够直接对样本中指定长度的miRNA分子进行高通量测序，可以在无需任何miRNA序列信息的前提下研究miRNA的表达谱，并发现和鉴定新的miRNA分子，提供更加全面的miRNA表达研究方法，加速新miRNA的发现，是当前miRNA表达研究的有力工具。
b) 靶点分析
● miRNA靶基因3'UTR载体
使用报告基因检测系统专门用来检测miRNA与靶基因的结合活性。报告系统包含SV40启动子驱动的报告荧光(hRluc)，其下游构建了靶基因3'UTR区域，通过对该荧光的监测，即可验证miRNA对该靶标是否有调控作用。
pmiR-RB-Report?报告基因检测系统专门用来检测miRNA与靶基因存在调控作用的可能性，该报告系统报告荧光(hRluc)，其下游构建了靶基因3'UTR区域，通过对该荧光的监测，即可验证miRNA对该靶标是否有调控作用；另有一校正荧光(hluc) 作为稳定内参，用于监测质粒表达效率。目前pmiR-RB-Report?报告基因检测系统覆盖人源的数百个基因。
● miRNA靶基因验证
将miRNA模拟物(miRNA mimic)与pmiR-RB-Report?报告基因质粒载体共转目的细胞系，通过萤火虫荧光素酶的活性分析，即可获得miRNA对潜在靶基因的调控作用的验证数据。
c) miRNA功能筛选
● miRNA表达载体构建
miRNA质粒表达载体是将发卡结构的pre-miRNA或者pri-miRNA构建在含特殊启动子的质粒表达载体，该载体转入细胞后可利用细胞内的miRNA加工成熟机制获得成熟的miRNA并发挥作用。
● miRNA功能研究
miRNA功能研究通常在细胞内或体内进行，并与细胞表型(如细胞增殖、细胞凋亡、细胞迁移等)和基因表达分析相结合。
● miRNA的生物信息学分析
miRNA参与复杂的基因调控，生物信息学工具可以在表达谱芯片数据分析与深度挖掘、高通量测序数据分析、靶基因预测、调控网络构建等方面取得快速高效的分析结果。
表1 miRNA生物信息研究策略
| 研究方向 | 研究策略 | 应用 |
| 靶基因预测 | 生物芯片荟萃分析； 多种算法软件预测 | 发现靶基因 |
| 靶基因功能 | 靶基因GO（功能富集）分析 | 发现生物功能 |
| 靶基因生物通路研究 | pathway生物通路分析：挖掘靶基因可能参与的生物通路 | 发现miRNA参与的生物通路和功能 |
| miRNA调控靶基因网络 | miRNA调控网络构建 | 寻找miRNA作用的关键基因 |
| miRNA的表达 | miRNA芯片表达分析 | miRNA表达水平 |
| miRNA及其靶基因的作用分析 | miRNA芯片表达差异 | 上调/下调的靶基因 |
图2多个数据库预测的miRNA靶基因的Venn图（from RIBOBIO CO.，LTD）
图3 miRNA调控网络（from RIBOBIO CO.，LTD）
锐博生物提供miRNA研究的全套产品和服务：
编辑: gaowei2010
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