miRNA功能筛选与分析
尽管目前在各种物种中发现了成千上万个miRNA，但已经鉴定功能的miRNA却少之又少。miRNA通常与靶基因mRNA 3' UTR区发生相互作用，进而关闭或抑制基因的表达，30%的基因表达受miRNA调控，影响到细胞增殖，细胞凋亡，细胞分化及相关信号通路等生命过程。
锐博生物拥有高度自动化的高通量高内涵筛选平台，能够为您提供值得信赖的miRNA功能筛选服务。您只需要提供miRNA名称及待研究的细胞系即可。
图1 miRNA功能筛选方法
一、miRNA功能筛选方法
高内涵筛选（High Content Screening， HCS）是一种能够进行荧光显微成像和定量图像分析的自动化筛选技术，能够在细胞水平进行系统性定量分析，利用各种荧光标记物（如Hoechst、GFP、荧光抗体等）来检测各类药物对细胞作用的多维信息，分析特殊分子靶位和生物特征，是药效结构发现、药物靶标确认、RNAi筛选、药物先导物优化和药物毒性评价的技术平台。
二、miRNA功能研究工具：
1） miRNA mimic
micrONTM miRNA mimic是运用化学方法合成的miRNA模拟物，能模拟细胞中成熟miRNA的高水平表达，以增强内源miRNA的调控作用，进行功能获得性（gain-of-function）研究。
2） miRNA inhibitor
micrOFFTM miRNA inhibitor是化学合成的，经过特殊修饰的miRNA抑制剂，通过特异性地与成熟miRNA分子结合而抑制其作用，可以削弱细胞中miRNA导致的调控作用，从而进行miRNA功能缺失性（loss-of-function）研究。可以用来筛选miRNA靶位点，筛选调控某一基因表达的miRNA，筛选影响细胞生长、增殖等过程的miRNA。
3） miRNA agomir
micrONTM miRNA agomir是经过特殊化学修饰的miRNA激动剂，通过模拟内源性miRNA进入miRISC复合物来调节靶基因mRNA的表达而发挥作用。与普通的miRNA mimic相比，miRNA agomir在动物体内具有更高的稳定性和miRNA活性，更易通过细胞膜，组织间隙而富集于靶细胞。在动物实验中可以用全身或局部注射等方法进行给药，作用效果持续时间可长达6周。
4） miRNA antagomir
micrOFFTM miRNA antagomir 是经过特殊化学修饰的miRNA拮抗剂，通过与体内的成熟miRNA竞争性结合，阻止miRNA与其靶基因mRNA的互补配对，抑制miRNA发挥作用。
miRNA antagomir均为miRNA成熟链的反向互补序列，全链进行甲基化修饰，在5' 端和3' 端分别有2个和4个碱基硫代修饰，并在3' 端连接有高亲和性胆固醇修饰。与普通抑制剂相比，micrOFFTM miRNA antagomir在动物体内外具有更高的稳定性和抑制效果，更易通过细胞膜、组织间隙而富集于靶细胞。miRNAantagomir在细胞实验中转染效率更高，甚至不需要转染试剂，从而避免了转染试剂包装过程的复杂步骤及其对实验的影响。在动物实验中可用全身或局部注射等方法进行给药，作用效果持续时间可长达6周。
三、miRNA功能分析方法
1）miRNA过表达选择依据
2）miRNA抑制方法的选择
3）基因表达谱芯片
miRNA通常与靶基因mRNA 3' UTR序列发生相互作用，导致关闭或抑制靶基因的表达。由于miRNA作用方式的特殊性，其可能与多个基因发生调控作用，进而影响到其他基因的表达变化。基因表达谱芯片可以大规模、高通量地分析各种生物过程变化中基因表达变化的全面信息。锐博生物采用先进的原位合成技术可高质量地合成数以万计寡核酸探针，系统全面地分析基因表达谱变化，可以依据客户的需求定制感兴趣的任何基因组合表达谱芯片，亦可定制已知基因组任何物种（包括但不限于大猩猩、恒河猴、马、牛、狗、猪等动物，大豆、花生、水稻、大麦、高粱、玉米、甘蔗、葡萄、拟南芥等植物，鸟类、鱼类、昆虫类、微生物以及各种病毒等）的基因表达谱芯片。
图2 采用基因表达谱芯片分析miRNA功能
编辑: gaowei2010
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