miRNA动物实验与分析
动物实验示例一：移植瘤
案例：
动物实验示例二：免疫系统疾病
micrONTM miRNA agomir是经过特殊化学修饰的miRNA激动剂，通过模拟内源性miRNA进入miRISC复合物来调节靶基因mRNA的表达而发挥作用。与普通的miRNA mimic相比，miRNA agomir在动物体内具有更高的稳定性和miRNA活性，更易通过细胞膜，组织间隙而富集于靶细胞。在动物实验中可以用全身或局部注射等方法进行给药，作用效果持续时间可长达6周。
图1 miRNA agomir具有更好的稳定性和持久的调控效果
（图片来源于Ni MJ, et al. Plos One. 2011）
micrON™agomir可以通过动物局部注射或者尾静脉注射，实现在局部或者全身特异性高表达目的miRNA的效果，并且操作简单方便，极大缩短了实验的准备周期和实验工作量。
案例分析
Hou J等人利用HCC细胞建立移植瘤裸鼠模型，成瘤后局部注射导入hsa-mir-199a-3p agomir, 实验结果显示导入agomir后能明显提高hsa-mir-199a-3p的表达量，并且移植瘤体积的增长速度也显著降低，肿瘤切片组织的坏死面积明显扩大。以上实验证明了hsa-mir-199a-3p在整体动物水平的功能，从而为肝癌的预防判断与生物治疗提供了新的潜在靶标（Hou J, et al. Cancer Cell. 2011）。
实验技术路线：
1、 利用肝癌细胞系SMMC建立皮下移植瘤裸鼠模型
2、 成瘤后(移植瘤体积达到5mm*5mm)开始注射agomir
1) 将agomir 稀释于经高压灭菌的PBS或者10%葡萄糖溶液中；
2) 注射剂量：每次注射agomir 1-10nmol，每隔3天注射一次，连续注射4周；
3) 注射体积：视肿瘤组织的大小而定，注射体积为25ul～100ul；
4) 注射点：在移植瘤组织中进行多点注射，一般均匀注射3-4个位点。
3、 实验结果评估
图2 采用miRNA agomir进行动物体内肿瘤研究
A：检测注射agomir后肿瘤细胞内miRNA的表达变化：注射72小时后取肿瘤组织提取总RNA，分别测试对照组和实验组的miRNA表达量。
B：检测注射agomir后对移植瘤生长的影响：在注射agomir的期间每周测量移植瘤体积的变化。
C：检测肿瘤组织的坏死情况，结果显示连续注射4周后实验组的肿瘤体积明显小于对照组。连续注射4周后，取肿瘤组织进行切片染色，实验结果显示实验组的坏死面积明显大于对照组面积。
micrOFFTM miRNA antagomir 是经过特殊化学修饰的miRNA拮抗剂，antagomir通过与体内成熟miRNA强竞争性结合，从而阻止miRNA与其靶基因mRNA的互补配对，进而抑制miRNA发挥作用。
miRNA antagomir均为miRNA成熟链的反向互补序列，全链进行甲基化修饰，在5' 端和3' 端分别有2个和4个碱基硫代修饰，并在3' 端连接有高亲和性胆固醇修饰。与普通抑制剂相比，micrOFFTM miRNA antagomir在动物体内外具有更高的稳定性和抑制效果，更易通过细胞膜、组织间隙，而富集于靶细胞。miRNA antagomir在细胞实验中转染效率更高，甚至不需要转染试剂，从而避免了转染试剂包装过程的复杂步骤及其对实验的影响。 在动物实验中可用全身或局部注射等方法进行给药，作用效果持续时间可长达6周。
图3 采用了化学修饰的miRNA antagomir具有更高的稳定性及更好的调控效果
（图片来源于Krutzfeldt, et al. Nature. 2005）
案例分析：
1. MicroRNA-328 Contributes to Adverse Electrical Remodeling in Atrial Fibrillation (Circulation. 2010;122:2378-2387.)
miRNA-328 antagomir按照80mg/Kg的给药量通过尾静脉注射，注射到WT及其TG小鼠, 连续给药3天，4周以后进行检测。
图4 采用miRNA antagomir进行动物实验表明其作用可持续5周
编辑: gaowei2010
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