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转基因小鼠技术服务
服务描述
利用原核显微注射技术直接将DNA显微注射到小鼠受精卵原核内生产转基因小鼠。
服务周期
- DNA质量鉴定及显微注射：1周
- 注射后受精卵移植入假孕鼠至小鼠出生：3周
- 小鼠基因型鉴定及成长至4周龄：4周
服务承诺
赛业生物科技承诺每个质粒DNA至少提供3只PCR鉴定阳性的小鼠，其中至少一只为雄性小鼠标准品系
FVB×FVB
C57×C57 （非标准品系请咨询 ）
服务流程示意图
载体构建
您也可以自行构建载体，由Cyagen进行DNA提取和纯化，客户提供自己制备的DNA需要注意以下事项：
1、制备用于显微注射的DNA必须高纯度，无污染（包括酒精、盐等）；
2、提供DNA的浓度应大于100 ng/μL，至少50μL，提供的BAC DNA浓度应大于40 ng/μL，体积至少100μL；
3、显微注射用的DNA应线性化，BAC DNA则无需线性化；
4、DNA的胚胎致死性可能与DNA的结构类型有关。
显微注射
将研究者提供的DNA 注射到200 个受精卵，显微注射后的受精卵回送到4 至5只代孕母鼠体中。如果每个质粒没有获得至少2 个首代转基因小鼠（经PCR 鉴定），则免费再注射100 个受精卵。如果第二次注射后仍未获得首代转基因小鼠，将不再进行显微注射，技术主管将与研究者开会讨论进一步的措施。
小鼠出生后7~10天，我们将取其脚趾进行基因型鉴定。小鼠出生后3周，将其断乳并隔离单独饲养，小鼠4周大小（1周后）即可发送到研究者手中。
有些研究者不需要小鼠而只需要胚胎，我们可以按照研究者的要求获取特定时期的胚胎（E10.5-15.5 d），并对获取的胚胎进行固定和/或LacZ染色（要求研究者提供的DNA中含有LacZ基因表达序列），从胚胎胎膜提取基因组DNA进行PCR鉴定。
转基因小鼠的鉴定
1、鼠尾DNA PCR鉴定
2、转基因小鼠表型确定
转基因胚胎的鉴定
1、胎膜DNA PCR鉴定
2、LacZ染色
3、蛋白检测（Western blot)
委托方须知
目的基因在转基因小鼠体内的表达以及转基因小鼠的生殖系遗传能力，在大多数情况下取决于目的基因本身的生物学特性，如果目的基因具有胚胎致死性，则研究者应能理解并支付显微注射的全部费用。
对于BAC DNA的显微注射，由于BAC DNA的特性决定了比质粒DNA低得多的成功率，注射200个受精卵未必一定能够得到首代转基因小鼠，如果研究者要求我们保证实验结果（为获得BAC DNA原核显微注射制备的首代转基因小鼠，我们建议研究者每个BAC DNA 注射两次）。
编辑: nina06
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