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结果判读：

若有支原体污染，在Vero细胞核外与细胞表面会出现蓝色萤光小点或是丝状点。其形状一致，与细胞残片染成之不规则点状物不同。其萤光可维持数星期。

图例 (A)为negative result : 萤光显微镜下，只观察到Vero细胞的细胞核，测试样品没有支原体的污染。(为positive result : 在Vero细胞核外与细胞表面会出现蓝色萤光小点和丝状点，表示测试样品有支原体的污染。

Positive Result 在Vero细胞核外与细胞表面会出现蓝色萤光小点和丝状点，表示测试样品有支原体的污染。

污染测试--支原体 :

PCR方法原理：

利用具特殊专一性之primers，经由PCR反应来复制mycoplasma DNA。所用之primers来自mycoplasma之conserved 16S-23S rRNA序列，由于此段spacer之序列依mycoplsma种类不同而不同，因此可依所复制之DNA大小及其restriction fragment大小差异来作侦测与鉴定。

特点：灵敏(e.g. 0.1~1.6 CFU / 5 ul sample) 与快速(一天)。可侦测不易培养之mycoplasma (e.g. M. hyorhinis)。不需培养mycoplasma作为正反应对照组，避免可能之污染。

缺点︰PCR反应很灵敏，易有伪阳性结果。此方法尚在评估中，故结果仅作为参考和内部品管之一部份。

材料与设备：

ATCC mycoplasma detection kit:可作50～100 reactions.
　　提供1st stage primer mixture与2nd stage primer mixture
　　positive control DNA (A. laidlawii ; M. pirum)
　　PCR reagents :
　　Taq polymerase ( 5 U / ul )
　　dNTP( dGTP, dCTP, dTTP, dATP, 1.25 mM each )
　　10x PCR buffer (with 1.5mM MgCl2)
　　25mM MgCl2
　　sterile ddH2O
　　Machine / Equipment：
　　PCR thermal cycler
　　agarose电泳设备
　　DNA电泳胶体观察设备
　　无菌PCR反应管
　　无菌1.5 ml微量离心管
　　无菌2ul, 20ul, 200ul, 1000ul Tips/ Pipetmans

方法：

此PCR反应是一种nested PCR，包括2阶段PCR反应，1st stage PCR结束后，取其反应物作2nd stage PCR，然后取2nd PCR产物作agarose gel electrophoresis，依DNA band之有无及片段大小来分析结果。

结果：使用UV light观察，并照相记录。

方法：

此PCR反应是一种nested PCR，包括2阶段PCR反应，1st stage PCR结束后，取其反应物作2nd stage PCR，然后取2nd PCR产物作agarose gel electrophoresis，依DNA band之有无及片段大小来分析结果。

结果：使用UV light观察，并照相记录。