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酶联免疫竞争法测定小分子药物时的酶标记物

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发布日期:2009-03-26 13:40 文章来源:丁香园
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关键词: 酶联免疫竞争法 小分子药物 酶标记物   点击次数:

随着政府对食品安全的检测额重视程度,越来越多的药物残留小分子检测试剂盒出现,酶联免疫竞争法试剂盒是其中的主力军,在采用酶联免疫竞争法检测小分子药物的模式中常用的方法有:

1. 包被抗原,酶标二抗进行的间接竞争法,该方法的好处在于对第一抗体不存在操作影响(没有认为的进行标记或其他处理),一抗活性好,并且抗原的包被一般不会出现过量包被造成IC50值较高,灵敏度降低的情况!但是该方法需要进行两次洗板操作过程麻烦,并且阴性OD值一半不会很高,多在2.0以下!线型范围较小,精确度较低!

2. 包被抗原,酶标一抗进行的标记抗体直接竞争法,该方法的好处在于操作简单,一步完成,包被一般不会出现过量包被造成IC50值较高,并且游离的抗原更容易和标记的抗体进行反应,灵敏度和精确度较高,阴性显色多在3.0以上。但是对于一抗进行标记难度较大,标记和后期纯化需要花费功夫!

3. 包被抗体,标记抗原进行的标记抗原直接竞争法,该方法的好处在于操作简单,一步完成,由于标记的抗原带有HRP相对游离的抗原与包被的抗体更容易结合,并且小分子标记后容易纯化分离,没有偶联的小分子通过透析即可除去,并且包被一抗对抗体的活性没有明显影响!但是该方法采用包被抗体的方法很容易造成包被过量影响IC50值,并且小分子的标记通常不能采用经典的过碘酸钠法,需要采用其他的化学方法,EDC。NHSEDC等,对酶的活性有一定的影响。

个人通过近期一些实验证明,直接竞争法IC50和线型范围明显优于间接竞争法,标记抗原和标记抗体相对来说标记抗原要稍好一些,关键在于后期纯化方便!抛砖引玉!!!希望大家能够针对此问题进行专题讨论!重点在于抗原抗体的标记,以及抗原的合成改造!

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编辑: ludongcn 作者:lzsgxl

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