单克隆抗体中建立ELISA方法的注意事项
最近园子里有很多战友问我有关在单抗制作中，如何利用ELISA筛选以及ELISA方法操作的注意事项，下面我先起个头吧，谈谈我的个人经验：）
ELISA，全称酶联免疫吸附实验，主要利用的是抗原抗体特异性结合的特点，可分为直接法、间接法、双抗体夹心法、竞争法等。下面以间接法为例进行介绍：
1、方阵ELISA。用途：①融合前后确定鼠血清中抗体效价；②拿到单抗腹水后，需要建立ELISA方法时首先要确定包被原及抗体的最佳工作浓度。
经典的方阵ELISA：将抗原和抗体各自稀释成不同梯度浓度，结果OD值P/N>2的均判为阳性，选取OD值在1.0左右的那个Ag-Ab浓度为最佳工作浓度，其主要原因与酶标仪灵敏度有关。
但是，对于抗原抗体而言，由于它们被稀释成不同浓度，那么在理论上，每个抗原稀释度情况下，总有一个抗体的稀释度其OD值在1.0左右，那么到底选取哪一个OD值1.0左右的好呢？这就需要同时用药物做个抑制来看，哪个浓度下抑制情况好，就取哪个抗原抗体浓度做工作浓度。
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2、间接竞争ELISA：在用方阵ELISA确定好抗原抗体最佳结合浓度后就可以做间接竞争ELISA了，其目的主要是考察抗体的特异性、绘制标准曲线，计算抗体对抗原的半数抑制、检测限等参数，也可以用来检测未知样品中的抗体。方法是用确定的抗原包被，在加一抗时同时加入不同浓度的标准品（一般是药物），然后加二抗，显色。用药物（即标准品）浓度的对数为横坐标、抑制率为纵坐标，绘制ELISA标准曲线，计算相关的参数，之后就可以将未知的样品所测OD值代入曲线方程求其中抗体的含量。通常这是建立ELISA检测方法的必备项目。
标准曲线可以绘成直线或是曲线（二次方程或三次方程）。通常是选取线性比较好的几个点绘成直线。直线斜率越高说明抗体的特异性及灵敏性好，R2
值越靠近1，则说明线性关系好。曲线绘好后，有一些常用的参数，如抑制率、半数抑制、检测限、定量限、标准偏差、变异系数等等：
抑制率（%）=1-B/B0（B0为不含药物的OD值；B为含有药物的OD值）
标准差（SD）=[∑（Xi-B ） 2 / （n-1）] 1/2；
标准偏差（RSD）=SD/B
编辑: ludongcn 作者:口口草芳
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