手把手教你作大鼠线栓（MCAO）模型＋灌注取脑＋TTC染色（二）
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6、用锡箔纸盖住后，放入37c温箱15～30min，不时翻动脑片，使均匀接触到染色液。
以下为丁香园网友讨论：
网友[pupil]：
请问用什么软件计算梗死体积。
网友[pipilulu]：
用ipp就可以。具体见http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=10&id=3561277&sty=2&age=0&tpg=1&ppg=1#3561277
网友[drzhenghb]：
1、露在外面的鱼线很容易被清醒的大鼠自行拔出，两位老兄是怎样避免的？
2、SD大鼠存在脑的侧支循环，怎样保证每个模型的均衡性？
3、梗死面积计算的质量控制。
网友[pipilulu]：
1、如果按0.3ml/100g给水合氯醛麻醉的话，大部分大鼠2小时再灌时尚未达到可自行拔线的清醒程度。我们一般留在外面的线的长度为2cm，长了容易掉，短了容易进入皮内。
2、据我们所知没法保证。只能通过增加样本数减小误差。
3、最好有切鼠脑的专用Rodent Brain Matrix，保证脑切片的厚度均一。但是经济型2500人民币左右；标准型5000人民币左右。不过我们没有。
做线栓模型的确有运气的成分。
鱼线进去2cm还多，但大鼠醒来后没有神经缺损考虑鱼线细，老鼠体重如何？我们体会如果老鼠体重250－300g，最好用0.26的蘸腊鱼线，直径大概0.28，进的深度约为1.8－2.0。
有时大鼠又缺损得厉害考虑：
1、蛛网膜下腔出血，可以取脑看看死亡原因。
2、如果鼠血管细而且进的深加上未再灌，死亡率应该很高。
最好根据老鼠体重及血管（ 颈总动脉）粗细选择不同粗细的鱼线。
我们有些也没有及时脱水包埋，但是能做出结果。
1、我们也查了不少文献，两种方法都有不少报道。
2、我们感觉从cca插线简单易成功。
3、大鼠颅内侧支循环特别好，血流再灌应该没问题。
4、我们有这样的体会：再灌时，如果线拔的过快，老鼠会出现一过性的症状加重，考虑是再灌注所致。
以下为丁香园网友讨论：
网友[pupil]：
请问用什么软件计算梗死体积。
网友[pipilulu]：
用ipp就可以。具体见http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=10&id=3561277&sty=2&age=0&tpg=1&ppg=1#3561277
网友[drzhenghb]：
1、露在外面的鱼线很容易被清醒的大鼠自行拔出，两位老兄是怎样避免的？
2、SD大鼠存在脑的侧支循环，怎样保证每个模型的均衡性？
3、梗死面积计算的质量控制。
网友[pipilulu]：
1、如果按0.3ml/100g给水合氯醛麻醉的话，大部分大鼠2小时再灌时尚未达到可自行拔线的清醒程度。我们一般留在外面的线的长度为2cm，长了容易掉，短了容易进入皮内。
2、据我们所知没法保证。只能通过增加样本数减小误差。
3、最好有切鼠脑的专用Rodent Brain Matrix，保证脑切片的厚度均一。但是经济型2500人民币左右；标准型5000人民币左右。不过我们没有。
liujuanll wrote:
谢谢你们提供的详细的资料。我近几个月来也是一直在做这个动物模型（没有再灌注一步）。上次参照你们的提示将颈总动脉牵拉后，鱼线很容易进去了，但是还是出现一个问题，有时候鱼线进去2cm还多，但大鼠醒来后没有神经缺损，有时大鼠又缺损得厉害，不到一天我给它断头的时候就死了，感觉象是在碰运气。我用的鱼线是0.2mm的，头端蘸清漆晾干。请教老师，你觉得还会有什么问题呢？
做线栓模型的确有运气的成分。
鱼线进去2cm还多，但大鼠醒来后没有神经缺损考虑鱼线细，老鼠体重如何？我们体会如果老鼠体重250－300g，最好用0.26的蘸腊鱼线，直径大概0.28，进的深度约为1.8－2.0。
有时大鼠又缺损得厉害考虑：
1、蛛网膜下腔出血，可以取脑看看死亡原因。
2、如果鼠血管细而且进的深加上未再灌，死亡率应该很高。
最好根据老鼠体重及血管（ 颈总动脉）粗细选择不同粗细的鱼线。
liujuanll wrote:
还有一个问题，我固定好的脑浸泡在多聚甲醛中放4度冰箱，没有及时脱水包埋，会不会有什么影响？
我们有些也没有及时脱水包埋，但是能做出结果。
shiqingsun wrote:
你们从CCA插线，再灌注时CCA没有血流，说是可以从Willis环得到血液供应，但是我估计大部分老鼠可能没有实施真正意义上的再灌注。为什么不从ECA插线？
1、我们也查了不少文献，两种方法都有不少报道。
2、我们感觉从cca插线简单易成功。
3、大鼠颅内侧支循环特别好，血流再灌应该没问题。
4、我们有这样的体会：再灌时，如果线拔的过快，老鼠会出现一过性的症状加重，考虑是再灌注所致。
作者: 雨后天晴、pipilulu 等
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