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（三）试剂和器材

（1）TSK DEAE SPW离子交换层析柱 （75mm×7.5mm,Bio Rad）

（2）高效液相色谱仪（包括控制系统、溶剂传递系统、高压加压活门和紫外280nm监测系统）

（3）PBS，缓冲液A和B。

（四）注意事项

（1）所用缓冲液和加样粗提物均需0.2μm滤膜过滤。

（2）在本实验条件下，IgG1峰一般在线性梯度洗脱开始11-12min。但不同类和亚类抗体以及不同特异性McAb的存留时间（retention time）有所差异。

【附录】

制备单克隆抗体常用的试剂

1．RPMT-1640培养液 其中含2mmol/L 谷氨酰胺，25mmol/L Hepes,5×10-5mol/L2-巯基乙醇

2.RPMT-1640完全培养液 上述溶液加10%～20%灭活小牛血清

3．HT母液×100

次黄嘌呤（H）1.0×10-2mol/L              136.1mg

胸腺嘧淀核苷(T) 1.6×10-3mol/L 　　　　　38.8mg

蒸馏水 　　　　　　　　　　　　　　　　  100ml

4. A母液×100

氨基喋呤(A) 4×10-3mol/L                 1.76mg

蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　　　　90.0ml

1mol/L NaOH                              0.5ml

溶解后,加1mol/L HCl 0.5ml,再补加蒸馏水至100ml 。

5．HAT选择培养液

RPMI-1640培养液                          80ml

灭活小牛血清　　　　　　　　　　　　　　20ml

HT母液×100                              1ml

A母液×100                               1ml

用5%NaOH调节 pH至7.4左右。

6．HT培养液

RPMI-1640培养液                          80ml

灭活小牛血清                             20ml

HT母×100                                1ml

用5%NaOH调节 pH至7.4左右。