分泌型碱性磷酸酶（SEAP）发光检测
原理：
分泌型碱性磷酸酶（secreted alkaline phos-phatase，SEAP）是人胎盘碱性磷酸酶的突变体，最大特点是能由表达细胞分泌到细胞外，检测时可在不破坏细胞的情况下，任意时间点取细胞培养上清液进行重复、动态的检测，且被检测细胞还可继续其他用途。使用发光检测方法可以进一步提高SEAP的检测灵敏度。
反应：
检测方法（详见附录）：
以CLONTECH的Great EscAPe™ SEAP检测试剂盒为例
1、试剂准备
a) 发光增强剂：将发光增强剂与buffer按比例混合（95ul+100ul每个样品），使用前平衡到室温
b) 稀释buffer：使用去离子水将5X Dilution buffer稀释为1Xbuffer
c) 化学发光底物：25mM的化学发光底物与发光增强剂以1：19的比例混合，避光保存
d) 阳性样品：在23ul空细胞的培养上清中，加入2ul的SEAP样品
2、样品处理
a) 取25ul细胞培养上清，加入1.5ml离心管中
b) 加入75ul的1X Dilution buffer，混匀
c) 65℃热处理30min后，降温到室温
d) 加入100ul发光底物，室温下孵育30min
3、检测结果
孵育结束后，放入Modulus发光检测仪检测发光值。
编辑: helen 作者:李鹏飞
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