HTRF术语详解 详细 >>
FRET：指荧光共振能量转移，在供体和受体相互靠得很近时，光子能从一个受激发的荧光团（供体）转移到另一个荧光团（受体），并使后者发出荧光。
HTRF：均相时间分辨荧光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence ）是用来检测纯液相体系中待测物的一种常用方法。
背景（Background）：指在没有加入compound时检测到的信号值。
荧光受体（acceptor）：指在荧光团受到激光激发时，能发出特定波长的发射光的基团。HTRF®的能量受体均可为XL665和d2。
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激酶领域的应用
Cisbio在Kinase应用方面主要分为以下几种：
1. 通用激酶检测试验
2. Heparanase检测解决方案
3. Ubiquitin检测解决方案
4. 磷酸化检测试验
●通用激酶检测试验
主要有HTRF ADP Transcreener试剂盒、HTRF KinEASE检测试剂盒2类产品，以及拆卖的HTRF® Kinase Toolbox。
●HTRF ADP Transcreener试剂盒
a) HTRF ADP Transcreener实验设计原理：这是一款以分析ADP浓度的通用激酶分析平台，可称之为“万金油”。试剂提供的是有荧光团供体标记的ADP抗体和荧光团受体标记的ADP。当有标记的抗体与有标记的ADP相结合后，他们便能发射荧光；当抗体与没有标记的细胞内ADP结合后，没有荧光产生。所以，通过检测荧光值的变化，便可量化细胞内的ADP。
b) 试剂盒的优点：
●使用ADP的特异单抗
●非放射性的均相筛选方法
●无需额外的检测酶
●可兼容所有底物
c)应用范围
●激酶与ATP酶的研究
●高通量筛选
●机理研究
●Profiling
●HTRF KinEASE检测试剂盒
a) HTRF KinEASE实验设计原理：相比HTRF® Transcreener® ADP，HTRF® KinEASE®系列产品具有一定的特异性。HTRF®KinEASE®产品也是通过测定ADP来确定激酶的反应，但除了这步以外，该产品还提供会被特定激酶磷酸化的特异底物。其测定原理是：Cisbio在设计了可与磷酸化底物相结合的抗体（抗体含有荧光团供体），底物则与另一荧光团受体连接；若抗体与含有荧光团的底物相结合，则能发射荧光；若底物无法被激酶磷酸化，则不会发射荧光。
b) KinEASE试剂盒分为2类（具体选择哪个，请致电Cisbio技术支持）
●本系列产品还分为两种：HTRF®KinEASE®STK和HTRF® KinEASE® TK。HTRF® KinEASE® STK产品是一个针对丝氨酸/苏氨酸为结合位点的激酶而设计的产品；HTRF® KinEASE®TK产品则是一个针对酪氨酸为结合位点的激酶而设计的产品。
c) 试剂盒的优点：
●系统稳定，已在100多种丝氨酸/苏氨酸和50多种酪氨酸激酶上得到验证
●酶消耗量很低
●试验灵敏度高
●ATP的检测范围大（可达到mM水平）
●能等比例放大或缩小反应体系，在特定情况下最低可达4uL
●受环境干扰小（EDTA），并有针对酪氨酸激酶的强化buffer（SEB）
d) 应用范围：
●丝氨酸/苏氨酸激酶或酪氨酸激酶的监测试验
●高通量激酶筛选
●机理研究（MOA）
●激酶Profiling
编辑: cq
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