HTRF术语详解 详细 >>
FRET:指荧光共振能量转移,在供体和受体相互靠得很近时,光子能从一个受激发的荧光团(供体)转移到另一个荧光团(受体),并使后者发出荧光。
HTRF:均相时间分辨荧光,Homogeneous Time-Resolved Fluorescence )是用来检测纯液相体系中待测物的一种常用方法。
背景(Background):指在没有加入compound时检测到的信号值。
荧光受体(acceptor):指在荧光团受到激光激发时,能发出特定波长的发射光的基团。HTRF®的能量受体均可为XL665和d2。
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cAMP检测实验的一般实验流程
实验准备:
1. HTRF cAMP检测试剂盒
该系列试剂盒含有(以cAMP Dynamic产品为例):
1) Anti cAMP - Cryptate
2) cAMP-d2
3) cAMP standard. Concentrated free cAMP
4) cAMP control. Free cAMP assay control
5) cAMP & cGMP conjugates & lysis buffer
6) Diluent
2. 实验所需的细胞
一般试验流程(一步实验法):
1. 细胞解冻
2. 按试剂盒说明,调制部分HTRF试剂
3. 添加细胞及HTRF试剂(cAMP d2 conjugates)
4. 室温孵化(Incubation)约半小时
5. 添加HTRF试剂(Cryptate conjugates in lysis buffer)
6. 室温孵化(Incubation)约1小时
7. 送入读板仪读板(read
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