HTRF术语详解 详细 >>
FRET：指荧光共振能量转移，在供体和受体相互靠得很近时，光子能从一个受激发的荧光团（供体）转移到另一个荧光团（受体），并使后者发出荧光。
HTRF：均相时间分辨荧光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence ）是用来检测纯液相体系中待测物的一种常用方法。
背景（Background）：指在没有加入compound时检测到的信号值。
荧光受体（acceptor）：指在荧光团受到激光激发时，能发出特定波长的发射光的基团。HTRF®的能量受体均可为XL665和d2。
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IP-one检测实验的一般实验流程
实验原理：
HTRF IP-one系列产品是针对Gq蛋白GPCR的分析平台。该产品通过抑制通路中IP-One的降解，来实现稳定检测Ca流通路的目的，可检测缓慢结合的GPCR。(如图示)
实验准备：
1. HTRF IP-one检测试剂盒（以HTRF IP-one Tb试剂盒为例）
该系列试剂盒含有：
1) Anti-IP1 cryptate Tb conjugate (lyophilized)
2) IP1-d2 conjugate(lyophilized)
3) IP1 calibrator
4) IP1 control(lyophilized)
5) IP-1 stimulation buffer
6) IP-1 Tb conjugate & lysis buffer
2. 实验所需的细胞
一般试验流程（以悬浮细胞为例）：
1. 按试剂盒说明，调制部分HTRF试剂
2. 细胞解冻/准备
3. 添加细胞、HTRF试剂（IP-1 stimulation buffer）、及化合物（Compound）
4. 37摄氏度孵化（Incubation），时间以优化实验的结果为准（约半小时至2小时）
5. 添加HTRF试剂（先加IP-one d2，再加Anti-IP1 cryptate Tb conjugate）
6. 室温孵化（Incubation）约1小时
7. 送入读板仪读板（read）
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编辑: cq
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