HTRF术语详解 详细 >>
FRET：指荧光共振能量转移，在供体和受体相互靠得很近时，光子能从一个受激发的荧光团（供体）转移到另一个荧光团（受体），并使后者发出荧光。
HTRF：均相时间分辨荧光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence ）是用来检测纯液相体系中待测物的一种常用方法。
背景（Background）：指在没有加入compound时检测到的信号值。
荧光受体（acceptor）：指在荧光团受到激光激发时，能发出特定波长的发射光的基团。HTRF®的能量受体均可为XL665和d2。
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TK类激酶检测实验的一般实验流程
实验原理：
经过多年研发，Cisbio合成了能与TK类激酶反应的单磷酸化位点底物，其另一端则接上了biotin。在biotin端，biotin能与streptavidin- XL665（acceptor）相连，完成标记。而在经过磷酸化之后，该底物便能与抗磷酸化位点的抗体（已标有Donor）结合，从而产品FRET信号。
实验准备：
1. HTRF KinEASE TK检测试剂盒
该系列试剂盒含有（以HTRF KinEASE TK产品为例）：
1) TK Substrate -biotin
2) Streptavidin-XL665
3) TK Antibody-Cryptate
4) Supplement Enzymatic buffer (SEB reagent)
5) HTRF Detection buffer
6) 5x Enzymatic buffer
2. 实验所需的激酶
3. ATP
4. 其他所需试剂（如MgCl2，CaCl2等）
一般试验流程（384孔低容量板实验法）：
Enzymatic Step
1. 按试剂盒说明，调制部分HTRF试剂
2. 添加激酶、ATP、化合物及HTRF试剂（Substrate-biotin）
3. 室温孵化（Incubation）
Detection Step
1. 添加HTRF试剂（Cryptate conjugates in lysis buffer）
2. 添加金属离子(EDTA等)及HTRF试剂（TK antibody-EU in EDTA）
3. 室温孵化（Incubation）约1小时
4. 送入读板仪读板（read）
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编辑: cq
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