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1、免疫组化脱片产生的原因？
（1）多聚赖氨酸玻片质量有问题。
（2）组织切的不好，切片机的问题或者切片厚度不均匀。
（3）组织自身有坏死。
（4）片子没烤好，时间短、温度不够。
（5）操作的时候用力甩片会促使粘贴不牢固的组织片脱落。
（6）抗原修复的时候高压时间过长或者放进修复液时手法不好容易导致脱片。此外，用EDTA修复比柠檬酸容易脱片。
（7）用PBS的时候尽量泡片，不要冲。
2、封闭血清的选择原则是什么？
为了防止组织或细胞切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性！实验前应用血清进行封闭。封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景。也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能与一抗来源一致。
免疫胶体金技术
2、金免疫渗滤分析
（1）试剂盒：渗滤装置为一充满吸水垫料的塑料小盒，在盒盖中央的小孔下面放置了一片硝酸纤维素膜，膜上预包被抗原或抗体斑点。
（2）反应模式：间接法、夹心法、捕获法、竞争法。
间接法：抗原固定于膜上→标本（抗体），洗涤→金标二抗。
夹心法：抗体A固定于膜上→标本（抗原）→金标单抗B。
捕获法：在固相载体上包被二抗→样品（待测抗体）→抗原→金标单抗。
竞争法：在载体上包被抗体→加入待测抗原→加入标记抗原
3、金免疫层析分析和金免疫渗滤分析的比较
（1）相同点：检测原理相同。以微孔滤膜为载体，滤膜的毛细管作用促进抗原抗体结合反应，通过胶体金结合物达到检测目的。
（2）不同点：
硝酸纤维素膜的种类、形式及组成方式。金免疫层析分析为狭长形膜，由4部分组成，依次是吸水纸、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜、吸水纸。金免疫渗滤分析为圆形硝酸纤维素膜及底层的吸水垫料。
标记配体的形式。金免疫层析分析为固相形式，金免疫渗滤分析为液相形式。
液体的移动方向。金免疫层析分析是通过层析作用的横向流动，金免疫渗滤分析是通过垂直穿透固定有配体的硝酸纤维素膜而进行。
操作步骤。金免疫层析分析大多只有加样一个步骤；金免疫渗滤分析有加样、洗涤、加标记配体等。
4、金免疫层析分析和金免疫渗滤分析特点
（1）单份测定，试剂和样本用量极小，样本量可低至1～2ul。
（2）不需任何检测仪器，适于现场应用。
（3）没有诸如放射性同位素、邻苯二胺等有害物质参与。
（4）实验结果可以长期保存。
（5）检测速度快，几分钟即可用肉眼观察结果。
5、胶体金免疫结合试验在临床检验中的应用
主要用于检测正常体液中不存在的抗原性物质、正常人含量极低而在特殊情况下异常升高的物质。
（1）激素。早早孕诊断试剂人绒毛膜促性腺激素，检测尿液。
（2）传染病病原的抗原和抗体。肝炎病毒、艾滋病病毒抗体等。
（3）性病病原：梅毒螺旋体抗体、淋球菌等。
（4）细菌：结核杆菌抗体、胃幽门螺杆菌抗体等。
（5）寄生虫：弓形虫抗体、血吸虫抗体等。
（6）肿瘤标记物：前列腺癌特异抗原（消化道恶性肿瘤尤其是结肠癌）、甲胎蛋白（肝癌）
（7）心血管病检测标志物：血清心肌肌钙蛋白、肌红蛋白和肌酸激酶同工酶，诊断急性心肌梗塞。
（8）其他蛋白质：甲状腺微粒体抗体（桥本甲状腺炎）
（9）其他：血糖、尿糖及尿液中吗啡和海洛因等。
6、金免疫结合试验的发展前景
（1）进一步提高检测灵敏度。采用信号放大系统如生物素亲和素系统或免疫金银染色法，并结合一些相应的简单检测仪器。
（2）实现检测多元化。在同一膜上作多种项测定，检测某些具有联检意义的物质。
（3）实现定量或半定量检测。
GIFA可用反射光密度计对斑点颜色的强度进行测定，可得到半定量的结果；控制受体捕获量：固定多种不同量的受体，在膜上包被多条反应线，观察各自显色情况，将待测物含量确定于某一浓度区间。
（4）通用试剂的应用。
胶体金标记葡萄球菌蛋白A代替抗人IgG标记物；链亲和素可作为通用固定受体，与各种生物素化抗体结合用于检测相应的抗原性物质。
编辑: gaowei2010
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