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兔单抗亲和力和灵敏度更高
相对于鼠单抗（解离常数Kd在10-9-10-10M水平），兔单抗的亲和力可提高100-1000倍（Kd在10-10-10-12M水平）。实际使用时，兔单抗的工作浓度更低，灵敏度更高，因此产生的背景更低，大大降低了假阳性的发生。用作免疫组化等用途时，有时甚至可免去抗原修复的步骤。
兔单抗能识别更多表位
很多蛋白在人类和啮齿动物中同源性很高，这些保守表位在小鼠体内免疫原性很弱，不容易产生高质量抗体。而兔做为宿主，可以更好地识别这些表位，产生针对更多表位的抗体。当然，兔也适合生产针对鼠类蛋白的抗体。
多肽基本常识
九、固相多肽合成Fmoc方法
任何多肽链的关键连接为肽键，由一个氨基酸的氨基与另氨基酸的缩合形成。通常一个氨基酸由一个中心碳原子组成，它由四个基它基团包围：氨基、羰基、基和侧链。侧链，称为R，区别不同氨基酸的结构。某些侧链含有干扰肽键形成的功能团。因此侧链功能团的封闭很重要。
图工显示了Fmoc合成的一般流程，首先第一个Fmoc氨基酸通过一个酸性接头接到不溶载体树脂上，Fmoc去保护通过用碱处理树脂来完成，一般是Poperidine。用预先激活或原位激活连接第二个Fmoc氨基酸。要求总多肽合成后，通过TFA分离来除去树脂和去保护。
1、Fmoc分离
固相多肽合成中多肽分离主要用酸解
Fmoc法用弱酸，比如TFA或TMSBr。各种添加剂， 一般为thiol compound ， 水和酚，用来保护多肽的免分离中Carbocation的破坏。
2、下列保护基与TFA和TMSBr分离相合：（略）
基于保护基团的类别，必须使用去保护剂的组合。 例如，当Boc和tButyl存在时，它们的Carbocation对应物能与Trp，Tyr和Met反应形成tbutyl产物。EDT是极有效的t-butyl trifluoroacetate清除剂，但它不保护Trp。因此，必须加水以控制烷基化。Trp的吲哚环和Tyr的OH极易与Pmc反应。水再次表现出对此反应的抑制。Trt和Mtr基团也有相似情形。较此适当组合清除剂将极大降低副反应。
tBoc和CBZ多肽合成
tBoc合成法见图3
3、tBoc法的分离法
Boc使用强酸，比如HF，TFMSA或TFMoTf。分离加入各种添加剂，一般为thiol化合物以保护多肽免受carbocation破坏。
4、HF分离法（如下）略
5、TFMSOTf分离
TMSOTf分离
SPPS的一般连接方法
适于固相多肽合成的连接反应要求酰化反应，对同源多肽最有效。
Fmoc SPPS连接方法FmocSPPS最常用的连接法是活性酯，要么原位，要预先激活。 起初P-nitrophenyl和N-hydnxysuccinimide激活酰是常用形式。甚至，有HOBt时，连接反应也很慢，此外，Fmoc氨基酸ONSu、酯与succinimido-carbonyl-β-alanine -N-Hydroxysuccinidide酯副产物的形成相关。今天最常用的激活酯是Opfp和Odhbt。有HoBt时反应速度极快，副产物少。
另一方面，使用象DCC，HBTU，BOP，BOP-Ce，或TBTU活化剂时，能原位进行许多连接反应。Carbondiimide的直接添加是最佳选择。然而，TBTU和HBTU第二个出现，接着BoP，最后是BoP-CE。再者，酯连接发现BoP/HoBt>Carbodiimido/HoBt> Carbodiimido/ODHbT> Carbodiimide/Opfp。
最近以来，HOAt和其对应Uronium盐同类物HATU的发展，发现此HoBt和HBTU具更强催化活性，结果是增加连接产出，缩短连接时间，消旋降低。故此，更适合阻位氨基酸的连接，使得难合成肽的合成更成功。
tBoc SPPS的普通连接法
Carbodiimides，主要是DCC是使用多年的连接试剂，主要的问题是激活和酰化过程中dicyclohexylurea的沉淀。并且伴有许多副反应，已有几种产生可溶脲的Carbodiimide，例如DIC， t-butylmethyl-和t-tatyllethyl-carbodiimide，但是这些试剂未解决副反应的问题。结果生产出了新的激活剂。首先是ＢＯＰ，随后是PyBrop， PyBOP，HBTU，TBTU和ＨＡＴＵ。所有前述试剂都要活性碱基。
所有前面讨论的DCC及其衍生物都通过对称酐的形成起作。通常，对称酐反应性极强已广泛用于SPSS，特别t-Boc合成中，对称酐整合入Fmoc氨基酸有一些困难，例如，从N-（3-dimethylamino propyl ） -N?/FONT>-ethyl -carbodiimides -HG制备的对称酐，由于Z-alkory-5（4H）-oxayolne中间体的形成， 在Carbodiimidie和tertiany amines存在时重排，还有，不是所有的Fmoc 对称酐都溶于DCM，或者无论所有试剂如何都不溶。
对称酐的另一种改变是混合酐，Carboxglic-Carbonate或Ｃarboxglic-phosphinic混合酐，典型的情况且是，由活性isobutyl-或isopropyl-choroformate制备这些，用Nox被阻氨基酸代替phosphinic chloride。通常反应迅速及少或无有副反应。
混合酐，N-carboxy酐（NCAS），也叫，Leuch酐，已广泛用于多聚氨基酸制备，这类化合物联合Nox保护和活化炭基，一旦和另一个氨基酸或肽残基反应，释放CO2做为副产物。
用光气处理α氨基酸很容易得到NCA衍生物，在严格调控条件下，NCA衍生物常结晶析出，便可使用。这些条件要求严格控制合成中的PH，在PH 值低于10时，NCA和肽或氨基酸残基反应产物，肽-Carbamate易失去CO2形成自由α－氨基端，发生聚合。pH10.5时，NCA便水解隆解。 所以反应在PH10.2条件下进行。别的条件要求是反应在0℃进行2分钟，要强烈搅动。反应产物老消旋，带有自由α-氨基，可以增加另一个酐而延伸。
十、液相合成
基于将单个N-α保护氨基酸反复加到生长的氨基成份上，合成一步步地进行，通常从合成链的C端氨基酸开始，接着的单个氨基酸的连接通过用DCC，混合炭酐， 或N-carboxy酐方法实现。Carbodiimide方法包括用DCC做连接剂连接N-和C-保护氨基酸。重要的是，这种连接试剂促接N保护氨基酸自己炭基和C保护氨基酸自由氨基间的缩水，形成肽链，同时产出N，N?/FONT>-dyaylcohercylurea副产物。然而，此方法因其导致消旋的副反应，或在强碱存在时形成5（4H）-oxaylones和N-acylurea而受到影响。庆幸地是，这些副反应能最小化，如果还不能完全消除。方法是加入象HoSu或HoBT这样的连接催化剂，此外，此方法也可用于合成N保护氨基酸的活性酯衍生物。依次产生的活性酯将自发与任何别的C保护氨基酸或肽反应形成新的肽。
当从副产品，diaydohexylurea分离活性酯有困难时，可用混合Carbonic酐方法，此方法由两步组成，第一步是在有tertiary碱的有机溶剂中用适当的酰基氯激活Nx保护氨基酸的炭基，第二步是让肽或氨基酸的自由氨基与Carbonic酐反应。Carbonic酐通常加到自由氨基的14倍。
虽然此方法在低温时高效高产，产品纯，但也有其缺点，例如，由羰基的强激活酐衍生物有消旋倾向。然而此问题在使用Nx-α-Urethane保护基（Cb2， 或tBoc）时便不会发生。进一步：由于高反应性，混合Carbonic酐倾向5（4H）-oxagolomes， Urerbanes diacyimide，酯的形成，并易失调。
编辑: wangminchao
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