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兔单抗亲和力和灵敏度更高
相对于鼠单抗（解离常数Kd在10-9-10-10M水平），兔单抗的亲和力可提高100-1000倍（Kd在10-10-10-12M水平）。实际使用时，兔单抗的工作浓度更低，灵敏度更高，因此产生的背景更低，大大降低了假阳性的发生。用作免疫组化等用途时，有时甚至可免去抗原修复的步骤。
兔单抗能识别更多表位
很多蛋白在人类和啮齿动物中同源性很高，这些保守表位在小鼠体内免疫原性很弱，不容易产生高质量抗体。而兔做为宿主，可以更好地识别这些表位，产生针对更多表位的抗体。当然，兔也适合生产针对鼠类蛋白的抗体。
多肽基本常识
促进这些副反应的条件是高温，延长激活时间（即，混合酐形成后，加到alkylchlorocarbonate和amine成份的时间，amine组成的 空间占位，平共处和混合酐的不完整形成。幸运的是，大多这些副反应，除形成哑唑酮和脲烷外，可通过低温进行反应（~-15℃），大为减少，并且缩短活化时 间（~1-2分钟）。为了使哑唑酮和尿烷形成最少，要实行如下措施：1）必要性须用无水有机溶剂，乙酸，四氢喃，t-butand，或 acetonitrile；2）应使用tertiary碱和N-methglmorpholine；3）必须用C b2或tBoc N- α保护氨基酸。
虽然用isobutyl-和ethylchlorocarbonate常用来形成羰酐，但确有别的连接试剂，例如，EEQD和IIQD用来与 CarboxaP成份反应形成erhyl-或isobutyl carbonate衍生物。不同于传统酐程序，EEQD和IIQD不要求碱，也不要求低温，通常要求一种有机溶剂（有许多也用）中0.1-0.4M浓度的 等摩尔量的羰和氨成份。之后EEQD或IIQD多加5-10%，温合液室温搅拌15-24小时。真空除去溶剂后，残留物溶于乙酸，用 1NHaHCO3，10% 枸橡酸和盐水洗剂，之后用无水Na2So4干燥，蒸发，产品可以重晶结或层析纯化。
这种方法避免了用碱，但仍有消旋和尿烷副产物，水平与经典相当。所以优势中于容易方便，但应注意，两种方法的详细比较，目前为重仍未有。
十一、HPLC分析和纯化
分析HPLC使用柱子和泵系统，可以经受传递高压，这样可以用极细的微粒（3-10μm）做填料。由此多肽要在几分钟内高度被分析。
HPLC分两类：离子交换和反相。 离子交换HPLC依靠多肽和固相间的直接电荷相互作用。柱子在一定PH范围带有特定电荷衍变成一种离子体，而多肽或多肽混合物，由其氨基酸组成表现出相反 电荷。分离是一种电荷相互作用，通过可变PH，离子强度，或两者洗脱出多肽，通常，先用低离子强度的溶液，以后逐渐加强或一步一步加强，直到多肽火柱中洗 脱出。离子交换分离的一个例子使用强阳离子交换柱。如sulfoethylaspartimide通过酸性PH中带正电来分离。
反相HPLC条件与正常层析正相反。多肽通过疏水作用连到柱上，用降低离子强度洗脱，如增加洗脱剂的疏水性。通常柱子由共价吸附到硅上的碳氢烷链构成，这 种链长度为G4-G8碳原子。由于洗脱是一种疏水作用。长链柱比短链对小的，高带电肽好。另一方面大的疏水肽用短链柱洗脱好。然而，总体实践中，这两类柱 互变无多少显著差别，别类载体由碳水化合物构成，比如苯基。
典型的操作常由两绶冲剂组成，0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用线型梯变以每分钟0.5%到1.0%改变的速度混合。常见分析和纯化用柱为 4.6×250mm（3-10μm）和22×250mm（10μm）.如果用径向填柱，那么大小是8×100（3-10μm）和 25×250mm（10μm）
大量各种缓冲剂含许多不同试剂，比如heptafluorobutyric酸，0.1%磷酸， 稀He formic酸（5-6%，pH2-4）， 10-100mM NH4HCO3， 醋酸钠/氨，TFA/TEA，磷酸钠或钾，异戊酚。这样许多不同组合可形成缓冲剂，但要注意一点：硅反相柱料不能长时间暴露于高pH，甚至微碱pH，因为 这样会破坏柱子。
十二、纯化
SPPS提取的粗肽含许多副产物，早期的纯化方法包括离子交换，分溶和反溶注析，更现代的方法是反相HPLC，一般于60残基或更少的肽很成功。当反相HPLC失败时，可按合离子交换HPLC。
通常分析HPLC结果用于决定纯化条件。例如，一种太肽用30%（0.1%TFA）acetonitrile洗脱出，这是分析HPL定出的。那么选择 acctonitrile浓度更低的缓冲液使得在isocratic条件下（比如28%，0.1% TFA acetonitrile）多肽在溶剂保持时间4-5分钟后洗脱。这样，根据柱子类型，我们的纯化条件用16-35%（0.1%TFA） acetonitrile线型梯度， 在一两小时内完成，之后用分析HPLC查检各种比例，使用我们isocranic条件选定的缓冲液。
编辑: wangminchao
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