单克隆抗体中建立ELISA方法的注意事项
半数抑制:指用药物(半抗原)去做竞争实验时呈现50%抑制效果时的药物浓度。药物浓度越低,而抑制率越高,则表示抗体对药物的特异性越好,灵敏度也高。半数抑制浓度IC50对应的OD值:OD IC50=0.5?B0
检测下限(LOD)对应的OD值:ODLOD =B0-3SD;
定量限(LOQ)对应的OD值:ODLOQ = B0-10SD;
3、间接ELISA操作中具体注意的问题:
间接ELISA一般有6个步骤:包被抗原、封闭、加一抗(在做竞争时同时加入药物)、加二抗、显色、终止。其中除了加显色和终止外,其余步骤之间都要进行洗板。在这里面,每一步都非常重要,假如有一步疏忽都会造成结果的不准确。通常ELISA结果会出现如空白显色、阴性偏高、方阵梯度不明显,还有如何提高间接竞争ELISA灵敏度等问题,其具体问题及解决方法总结如下:
由于时间仓促,就先整理了这么多,希望各位战友都进来参与讨论,交流经验!
编辑: ludongcn 作者:口口草芳