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如何高效去除支原体污染?

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发布日期:2012-09-25 11:12 文章来源:丁香园
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关键词: 细胞 技术专题 安倍生物 丁香通 丁香园   点击次数:


支原体真是让人崩溃的家伙。悄然无息,杀死细胞。与细菌和真菌相比,支原体造成的污染不论在检测、预防还是去除 上都更为困难。为什么呢?首先因为它极小,直径在0.2-2 μm,可以轻松地通过滤膜,混入培养系统中;而且它没有刚性的细胞壁,因此普通的抗生素对它根本不起作用。基于以上两点,它即使生长到很高密度,也没有明显的污染迹象,容易逃过实验人员的法眼,逍遥法外。然而,支原体的存在改变了实验结果,怎么办?

对培养物进行常规的支原体预防非常重要。一般来说,另外,每两三个月进行一次定期检测是必要的。如果有新细胞进入实验室,或准备将细胞进行液氮保存,都应该进行检测。当然,如果细胞不大对劲,应立马检测。别不以为然,有研究报告称25%的细胞都存在支原体污染。

目前有多种方法检测支原体,美国MP  Bio公司也推出了一款 ImmuMark? MycoTest? 试剂盒,它运用免疫荧光方法来检测培养细胞中的支原体污染。这种方法特异性好,也相当快速,能在1小时内获得结果。

若是不幸中招了,那也只能坦然面对。如果可以的话,将细胞扔掉,重新开始吧。若细胞极其珍贵,你可以试试市场上的一些支原体去除试剂,比如MP Bio的MYCOPLASMA REMOVAL AGENT(MRA)。据说,这款试剂被欧洲动物细胞培养协会(ECACC)认为是去除支原体最有效的产品。

MRA具有很强的抑制支原体活性的能力,可从被污染的培养细胞中彻底去除支原体。它属于抗生素喹啉家族的衍生物,通过抑制支原体DNA旋转酶来去除支原体污染,DNA旋转酶是DNA复制过程中必不可少的酶类。

MRA的活性在细胞培养物中可以维持长达7天,对多种支原体株系均有作用,并且浓度达到0.5 μg/ml即可发挥功效。MRA使用非常方便,只要添加到支原体污染的培养细胞中孵育一周即可。一旦使用了MRA,培养细胞就不会再受到同样的支原体污染,从而起到预防污染复发的效果。当然,它也可以作为预防支原体污染使用的试剂。预防浓度为0.1 μg/ml即可。

 



权威推荐

European Collection of Animal Cell Cultures推荐使用;

强烈支原体杀灭作用

MRA属于抗生素奎林家族衍生物,通过抑制DNA促旋酶清除支原体污染,该酶是微生物DNA复制过程中必不可少的酶类;

作用浓度低,范围广,细胞毒性小;

在0.5μg/ml 的工作浓度下通过抑制支原体的DNA螺旋酶来杀死支原体;在0.1μg/ml 的工作浓度下有效预防各种支原体污染,在工作浓度下使用时几乎没有细胞毒性,MRA在细胞培养物种可以维持长达7天;

水溶性的喹啉衍生物,即用型,室温稳定,每个包装可用于25次培养;

使用方便

MRA使用非常方便,只要添加到细胞培养物种孵育一周即可;

编辑: gaowei2010

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